Аффинная хроматография

Интересным хроматографическим методом является аффинная хроматография, основанная на негативной специфичности некоторых биополимеров, особенно если они содержатся в культуральной жидкости в небольших концентрациях - менее 1 мкг/мл. в этом методе хорошее разделение достигается за счет специфического взаимодействия между иммобилизированным агентом и растворенным веществом.

Между аффинной хроматографией и другими более традиционными методами адсорбционной или ионообменной хроматографии существуют значительные различия. В традиционных хроматографических методах сначала адсорбируются все компоненты смеси, а их разделение осуществляется на стадии десорбции посредством, например, замены концентрации элюента, или концентрации солей в элюенте, или постепенного повышения рН элюента. Напротив, специфичность аффинной хроматографии определяется в основном на стадии сорбции (рис.8.3). Поэтому в аффинной хроматографии через колонку целесообразно пропускать раствор разделяемой смеси в течение достаточно длительного промежутка времени, пока не будет достигнуто насыщение неподвижной фазы, так как в ней адсорбируются практически только выделяемые соединения. Таким образом, проведение разделения БАВ в аффинной хроматографии приближается к обычной сорбции в неподвижном слое вплоть до насыщения слоя адсорбента и резко отличается от обычного разделения многокомпонентной смеси, вводимой в колонку однократно в виде концентрированного раствора.

Рис. 8.3. Схематическое представление аффинной хроматографии:

а – ввод смеси веществ; б – разделение; в – элюирование связанного; с- неподвижной фазой компонента смеси

В этом методе хорошее разделение достигается за счет специфического взаимодействия между иммобилизованным агентом и растворенным веществом. Показаны три стадии: ввод смеси веществ а, разделение б; элюирование, связанное с неподвижной фазой компонента смеси в.