Лабораторный мониторинг ВИЧ – инфицированных

Особенности лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции у детей

Выделение вируса. Культивирование ВИЧ in vitro.

В качестве материала обычно используют лимфоциты периферической крови, ликвор, амниотическую жидкость, биопсийный материал мозга и солидных лимфоидных тканей и пр. Для индикации вируса регулярно просматривают культуру клеток под световым и электронным микроскопом на наличие синцитиев и вируса. Кроме того, используют определение обратной транскриптазы в надосадочной жидкости, исследуют экспрессию антигена путем непрямой иммунофлюоресценции, определяют антиген ВИЧ в ИФА, выявляют нуклеотидные последовательности ВИЧ молекулярно-генетическими методами.

Лабораторная диагностика ВИЧ – инфекции у детей, рожденных от ВИЧ – инфицированных матерей, имеет свои особенности. Это связано с тем, что в крови как инфицированных, так и неинфицированных детей в первые 6-12 (у некоторых детей до 18) месяцев жизни обнаруживаются антитела к ВИЧ материнского происхождения. У неинфицированных детей эти антитела исчезают, а у инфицированных начинают вырабатываться собственные антитела. Критерием, свидетельствующим о наличии у ребенка ВИЧ – инфекции, является обнаружение у него антител к ВИЧ в возрасте 18 и более месяцев. Снятие с диспансерного учета осуществляется в возрасте 18 месяцев при наличии 3-х следующих условий:

- отрицательного результата исследования на антитела к ВИЧ;

- отсутствия гипогаммаглобулинемии;

- отсутствие клинических проявлений ВИЧ – инфекции.

Порядок обследования детей вирусологическими методами:

- в первые 48 часов жизни;

- в возрасте 10-14 дней;

- в возрасте 1-2 месяца – первое обязательное обследование;

- в возрасте 4-6 месяцев – второе обязательное обследование.

При дважды отрицательном результате исследования ДНК ВИЧ с интервалом обследования в один месяц диагноз ВИЧ – инфекция может быть отвергнут, но окончательное решение о снятии данного диагноза может быть принято в возрасте 18 месяцев после повторных серологических исследований.

Иммунологический (определение CD4-лимфоцитов) и вирусологический мониторинг (определение вирусной нагрузки) при ВИЧ – инфекции имеют определяющее значение для установления стадии заболевания, прогноза развития инфекции и контроля эффективности антиретровирусной терапии. Кратность плановых лабораторных обследований в период диспансерного наблюдения как до назначения, так и в период проведения антиретровирусной терапии должна соответствовать учрежденному стандарту медицинской помощи (приказ Минздравсоцразвития России №474 от 09.0702007 г.). Объем плановых повторных обследований зависит от стадии болезни. Внеплановые обследования проводятся по назначению лечащего врача при появлении признаков прогрессирования ВИЧ – инфекции или развитии сопутствующих заболеваний.

При оказании стационарной медицинской помощи кратность лабораторных обследований имеет отличия и должна соответствовать стандарту специализированной медицинской помощи (приказ Минздравсоцразвития России №475 от 09.07.2007 г.)

Определение CD4 – лимфоцитов осуществляется методом проточной цитометрии. Измерение уровня CD4 – лимфоцитов позволяет судить о глубине развившегося у больного иммунодефицита (таб.4). Это – стандартное исследование, проводимое для оценки вероятности прогрессирования ВИЧ – инфекции, поскольку прогрессивное уменьшение количества СD4 – лимфоцитов является одним из основных маркеров ВИЧ – инфекции, обусловливающих развитие вторичных заболеваний. Это самый надежный прогностический показатель темпа прогрессирования заболевания, а также критерий для принятия решений в отношении назначения антиретровирусной терапии и профилактики оппортунистических инфекций. Чем длительнее период времени, проходящий от сероконверсии ВИЧ до снижения иммунорегуляторного индекса (CD4/CD8) до значения меньше единицы, тем вероятнее медленное прогрессирование ВИЧ – инфекции.

Таблица 4. Иммунологические критерии иммуносупрессии.

В проточном цитофлюориметре клетки друг за другом проходят через лазерный луч, при этом анализатор измеряет два типа параметров – параметры светорассеяния и параметры флюоресценции. Таким образом, проточный цитофлюориметр сочетает принцип работы флюоресцентного микроскопа и автоматического гематологического анализатора. Идентификация клеток происходит на основании наличия или отсутствия у них определенных поверхностных антигенов, выявляемых с помощью моноклональных антител, меченных флюорохромами.

Лечение ВИЧ – инфекции