Лабораторная диагностика

Микроскопическое исследование: мазки фиксируют погружением полностью в жидкость Никифорова на 20 мин. Окраска по Граму обязательна во всех случаях. Одновременно окрашивают мазок метиленовым синим Леффлера, так как этот метод лучше выявляет биполярность.

Бактериологический метод - выделение культуры Y.pestis является бесспорным подтверждением диагноза чумы.

Для лабораторного исследования используют

пунктаты бубонов, пустул,

отделяемое язв,

кровь,

мокроту,

испражнения,

спиномозговую жидкость,

мазки из ротоглотки,

секционный материал,

пробы воздуха из помещений, где госпитализированы больные с пневмонией, иногда смывы с одежды и предметов обихода больных.

Посевы исследуемого материала производят на агар с добавлением стимуляторов роста (кровь, сульфит натрия). При исследовании материала, обильно загрязненного посторонней микрофлорой (загнившие трупы, мокрота), к агару добавляют генциановый фиолетовый 1 : 100 000.

В жидких средах чумной микроб не выдерживает конкуренции с другой, загрязняющей флорой, поэтому в них засевают только кровь и ликвор, взятые в асептических условиях. Получение положительного результата исследования возможно через 48-72 часа.

На пластинках агара сначала образует прозрачные "кружевные платочки", что имеет диагностическое значение, а затем вырастает в виде блестящих, серовато-белых, прозрачных колоний с выпуклыми мелкозернистыми центрами и плоскими, волнистыми ("фестончатыми") краями (R-форма). При температуре 26-28 ⁰С колонии суховаты, а колонии же, полученные при температуре 37⁰С имеют маслянистую консистенцию, вследствие чего клетки легче суспендируются, иногда тянутся за петлей. По мере старения центр их становится более грубым, менее прозрачным и приобретает коричневатый оттенок. На кровяном агаре через 48 ч. при температуре 37⁰С образует подобные же колонии, но менее дифференцированные; иногда вызывает альфа-гемолиз, а также легкое просветление среды или делает её более тёмной. На скошенном агаре микроб растёт в виде сероватого, вязкого, влажного, нежного, прозрачного налёта. На пластинках желатины формирует плоские серые колонии с зернистыми центрами. В столбике желатины растёт по поверхности и в глубине, среду не разжижает. На свернутой сыворотке по Лёффлеру через 24 ч. при температуре 37 ⁰С даёт довольно хороший сливной рост, разжижения не вызывает. Молоко с лакмусом не свертывает, цвет его не изменяет или вызывает легкое покраснение. На картофеле развивается слабо.

В бульоне обычно образует хлопьевидный или порошковидный, легко распадающийся при встряхивании осадок, жидкость над ним остается прозрачной. Часто образует нежную пленку; в старых культурах от неё вглубь среды могут отходить нити "сталактиты".

В связи с относительной неприхотливостью Y. pestis растёт на синтетических средах с аминокислотами (в качестве источников азота) и ферментируемыми углеводами. В витаминах и азотистых основаниях, как правило, не нуждается.

На жидких средах хорошо развивается при аэрации. Оптимум температуры роста 26-28 ⁰С, пределы от 2 до + 45 ⁰С. Оптимум pH ( 7,0--7,2, пределы - 5,0-9,5.

Чаще образует бактериоцин (пестицин I), свертывает плазму крови и вызывает фибринолиз. Мочевину обычно не разлагает . Индол и ацетилметилкарбинол не образует. Продукция сероводорода бывает на жидких средах с ферментируемыми сахарами. Дает положительную реакцию на аммиак и обычно с метиловым красным. Метиленовую синь редуцирует редко. Нитраты чаще восстанавливает до нитритов. Каталазу и оксидазу образует. Декарбоксилирует аргинин и нерегулярно гистидин. Углеводы и их производные ферментирует до кислоты без газа.

Одновременно с посевами производят биологическую пробу на морских свинках или белых мышах (внутрибрюшинное, подкожное, накожное заражение). Гибель животных наступает на 5-9 дни (может быть ускорена при одновременном с материалом введении гидрокортизона). Учитывают патоморфологическую картину гибели животных, проводят бактериоскопию мазков отпечатков из органов, подвергают бактериологическому исследованию материал из паренхиматозных органов зараженных животных. Т.о. возможность получения положительного результата исследования удлиняется до 7-11 дня.

Серологические методы используются для ретроспективной диагностики, роль их повышается в условиях ранней антибактериальной терапии.

Основаны на выявлении антител к капсульному антигену, т.о. не пригодны для выявления заболеваний, вызванных F1-негативными штаммами. Наибольшее распространение имеют РНГА и ИФА. Последний отличается большей чувствительностью, стабильностью, объективизацией учета результатов, возможностью автоматизации.

Иммунологические методы основаны на выявлении антигена F1. Используются антитела к капсульному антигену (в т.ч. и моноклональные) в методе РНГА и ИФА.

Молекулярно-биологические методы. Метод гибридизации с использованием видоспецифического зонда из фрагмента pPst. Метод позволяет выявлять единичные клетки возбудителя, недостатками его является необходимость маркировки зондов радионуклидами и трудность учета результатов. Эти недостатки нивелируются при использовании полимеразной цепной реакции - ПЦР, продолжительность исполнения которой составляет несколько часов и выявляет единичные клетки возбудителя.

Ускоренные методы бактериологического исследования.

Метод ускоренного обнаружения возбудителя чумы с помощью бактериофага, внесенного в исследуемый материал, используют для исследования объектов, имеющих основное практическое значение: материал от больного, от трупа, из внешней среды.

Его высокая специфичность и вирулентность для чумной палочки позволяют применять его для идентификации чумы путём внесения в исследуемый материал — о положительном результате свидетельствует образование негативных колоний бактериофага либо увеличение титра бактериофага в среде.