Зворотний приклад генетика
Ген, який кодує м'язи специфічний фактор транскрипції в миша
Міогенін
Гомологічною рекомбінації використовуються для видалення гена
Миші народився, але не може зробити м'язи
Гомологічною рекомбінації була використана для визначення ролі генів, які експресуються в розвиваються м'язові клітини. Міогенін ген був ідентифікований як транскрипційні фактор, який зміг перетворити nonmuscle клітин в м'язові клітини. Тим не менш, його роль в природних умовах не було відомо, поки вона була частково вилучена у мишей. Миші, які були гомозиготні по видаленню не зробити нормальний м'язів, тому що клітини-попередники не були здатні диференціюватися в м'язах.
34. RNAi і антисмислової РНК
Дволанцюжкової РНК в змозі порушити експресію генів
Клітини мають машини, які руйнують дволанцюжкової РНК
По-видимому, основою для наступних цілей:
Інтерферуючих РНК (РНК-інтерференції)
Дволанцюжкової РНК вводили в клітини
антисмислової РНК
Уявіть комплементарної РНК
Форми дволанцюжкової РНК в клітинах
Експресії РНК може бути порушена в процесі залежить від дволанцюжкової РНК. Коли дволанцюжкової РНК перебуває в клітці, РНК руйнується. Здатність клітин до розпізнавати і знищувати дволанцюжкової РНК мабуть, основою, на якій інтерферуючих РНК (РНК-інтерференції) і антисмислової РНК порушити експресію генів. У разі РНК-інтерференції, дволанцюжкової РНК вводять в клітини, в той час як для антисмислової РНК, додаткові молекули РНК зроблений, який утворює дволанцюжкові молекули РНК в клітині. В обох випадках, зазвичай результатом є зниження достатку РНК-мішені, але не повної ліквідації.
35. Механізм РНК-інтерференції I
RNAi ймовірно, залежить від системи, що використовується для визначення наступного:
Дволанцюжкові (DS) РНК-вірусів
Інші ненормальні експресії генів
Спочатку характеризується наступним:
гриб
Придушення в Neurospora
рослини
Опір поширенню вірусу
Існує все більше свідчень про те, що РНК-інтерференції залежить від системи, яку організм використовує для виявлення дволанцюжкової РНК-вірусів, а також інші порушення експресії генів. Цей механізм був спочатку відрізняється тим, гриб Neurospora, де явище відоме як придушення, так і в рослинах, де він відповідає за стійкість до розповсюдження вірусу.
36. Механізм РНК-інтерференції II
Стільниковий РНКази визнає дцРНК
Пристане до невеликим (23 б.п.) фрагментів
Фрагменти стенограми гибрідизуючою
РНК-залежна РНК-полімераза утворює дцРНК
RISC нуклеази жує дцРНК
Нинішній зору механізму є те, що стільникові РНКази конкретно визнається дцРНК і розщеплює її на дрібні (23 б.п.) фрагментів. Ці фрагменти потім дисоціюють і reanneal до додаткових РНК-транскриптів. РНК-залежна РНК-полімераза використовується відпалений фрагментів прем'єр виробництва дволанцюжкової РНК. Дволанцюжкової РНК визнається комплекс білків, відомих як RISC, який розщеплює її на дрібні шматочки.
37. Систематичне екранів RNAi
Замочіть в рішенні дцРНК
Потік бактерій, висловивши дцРНК
Або вводять дцРНК
Робить систематичне екранів RNAi можливо
~ 75% часу, RNAi дає зниження рівня РНК
Були використані для зниження експресії генів
Зокрема хромосом, або
Виражені в певному часі розвитку
Для аскариди, C. Елеганс, представляючи RNAi в організм виявляється дивно легко зробити. Хробаки можуть бути або просочені розчином дцРНК, годували на бактерії, які виражають дцРНК, або вводять з дцРНК. Ці технології зробили можливою широкомасштабної систематичної зворотного генетичних екранів за допомогою РНК-інтерференції. На сьогоднішній день RNAi були використані для зниження експресії кожного гена на певній хромосомі або кожен ген, який виражається в певному органі. Тим не менш, RNAi не завжди призводить до зниження експресії генів. Сучасні підходи з'являється на роботі близько 75% часу.
38. RNAi на всіх генів у хромосомі
Мета: В C. Елеганс, визначити функції усіх генів 2300 на хромосомі III
RNAi будує зроблені для кожного гена
Хробаки мікроін'єкції з дволанцюжкової РНК
Група на чолі з д-ром А. Хайман використовував RNAi проаналізувати функції всіх генів у хромосомі III С. Елеганс. Конструкції, які будуть виробляти дцРНК були зроблені для кожного гена на хромосомі III, заснований на повній послідовності генома. Хробаки були мікроін'єкції з дволанцюжкової РНК, що відповідають кожному з 2300 ORFs на хромосомі. Хробаки були потім спостерігали за фенотипу в результаті інтерференції РНК-інтерференції з експресією генів