Материалы и оборудование

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Материалы и оборудование

Пробирки с МПА, стерильные пипетки, стерильные чашки Пет­ри, мясо свежее и несвежее, водяная баня, ножи, скальпели, шпатели Дригальского, пробирки со стерильной водой, фуксин, спирт с эфиром, микроскопы и все необходимое для микроскопирования.

Широкое использование антибиотиков, в частности биомици­на, террамицина и других, в рационе животных, а также для лечения и профилактики болезней, привело к появлению форм микроорганизмов, резистентных (устойчивых) к различ­ным антибиотикам, в том числе к пенициллину.

Для того чтобы определить наличие в свежем мясе резис­тентных к антибиотикам бактерий, используют метод бумаж­ных дисков, пропитанных данными антибиотиками. Предпоч­тительнее использовать антибиотики тетрациклинового комп­лекса, широко применяемые при выпаивании телят и кормлении взрослых животных.

Метод основан на диффузии антибиотика из пропитан­ного антибиотиком диска фильтровальной бумаги в плотную питательную среду. Содержание большинства антибиотиков в дисках колеблется от 1 до 50 мкг. На практике пользуются стандартными дисками, выпускаемыми промышленностью (см. 6.2.7).

В стерильные предварительно подсушенные чашки Петри разливают по 20 мл МПА. На поверхность среды высевают сус­пензию суточной агаровой культуры микроорганизма. Граду­ированной пипеткой берут 0,02 мл этой суспензии (одна капля) и стерильным шпателем растирают досуха на питательной среде в чашке Петри у пламени горелки. Затем стерильным пинцетом раскладывают диски фильтровальной бумаги, пропитанные раз­ными антибиотиками, — не менее 4—6 дисков.

Чашки выдерживают 30 мин при комнатной температуре (период преддиффузии препаратов в среду). Затем чашки по­мешают в термостат при 37 °С на 16—18 ч.

При оценке результатов опыта измеряют диаметр зон за­держки роста микроорганизмов вокруг дисков с антибиотика­ми, включая диаметр самих дисков. Отсутствие зоны задержки роста микроорганизма означает, что испытуемый штамм устойчив к данному препарату. Зоны диаметром до 10 мм указывают на малую чувствительность, зоны диа­метром больше 10 мм — на чувствительность микроорганизма.

Результаты опыта записывают в следующую таблицу:

Стерильный МПА в колбах или пробирках, стерильные чашки Петри, диски, пропитанные антибиотиками, чистые культуры микроорганиз­мов, стерильные градуированные пипетки на 1 мл, стерильные шпатели, стерильная вода (по 5 мл) в пробирках.

15.5. Микробиологический контроль воды