Учет бактерий в ризосфере методом Красильникова
Общие сведения
Микроорганизмы, обитающие в ризосфере и ризоплане растений
Материалы и оборудование
Гелевые пластины, пропитанные минеральной средой Виноградского (в чашках Петри), симазин или атразин, почва, микроскопы и вес необходимое дли микроскопирования.
Чем ближе к корневой системе расположена почва, тем больше бактерий в ней содержится. Особенно много микроорганизмов на поверхности корня — в ризоплане (от греч. rhiza — корень, plane — ровно). Здесь обитают преимущественно эпифиты (от греч. epi — над, на; phyton — растение). В слое почвы (2—3 мм), прилегающем к корням, получившем название ризосферы, в качестве дополнительного источника питания бактерии используют продукты распада отмерших тканей корня. Питательными веществами для бактерий, обитающих на корнях, служат продукты экзосмоса растений (корневые выделения).
В ризосфере могут развиваться те же формы бактерий, что и в почве, отдаленной от корней, но на корнях обычно преобладают неспороносные палочки рода Pseudomonas, причем на корнях злаков, бобовых и других растений поселяются неодинаковые их виды и разновидности. Это объясняется различием в обмене веществ у отдельных видов растений.
В прикорневой зоне растений бактерии в известной мере играют роль санитаров, очищая се от продуктов метаболизма растений. Минерализуя органические остатки, они в то же время переводят ряд элементов питания в доступную для растений форму. Отдельные виды бактерий, развивающиеся на корнях, продуцируя ростовые вещества и витамины, оказывают положительное влияние на рост растений. Однако многие бактерии корневой зоны обладают денитрифицирующей способностью и в условиях недостаточной аэрации могут обусловить значительные потери азота из почвы.
Стерильной лопатой подкапывают почну под растением, стерильным пинцетом извлекают корни. Приставшую к корням почву стряхивают в стерильную чашку Петри, перемешивают и из нее берут навеску в 1 г (одновременно берут навеску для определения влажности почвы). Навеску помещают в 100 мл стерильной водопроводной воды и готовят ряд разведений.
При поверхностном посеве из полученных разведений стерильной микропипеткой наносят на поверхность питательных пластин (МПА, КАА и др.) по 0,05 мл и шпателем досуха втирают в агар. При глубинном посеве из разведений стерильной пипеткой берут 1 мл суспензии и вносят в стерильную чашку Петри, а затем добавляют соответствующую агаризованную питательную среду.
Выросшие на агаре колонии подсчитывают визуально и под лупой (см. 5.1.1).
Для определения качественного состава бактерий колонии на чашке группируют по культуральным признакам. Из каждой группы готовят препарат и выявляют форму бактерий. Видовую принадлежность устанавливают, делая пересев из колонии на скошенный агар, и после очистки культуры изучают ее морфологические и физиологические признаки.