Группы микроорганизмов, выявляемые методом обрастания комочков почвы

Группы микроорганизмов, выявляемые на жидких средах (метод предельных разведений)

Аэробные целлюлозоразрушающие микроорганизмы количественно можно учесть на среде Имшенецкого и Солнцевой, содержащей (%): NaNO₃ — 0,25; К₂НРО₄ — 0,1; MgSO₄•7H₂O – 0,03: NaCl – 0,01; СаС1₂ - 0,01;СаСО₃ - 0,5; добавлять мел необязательно.

По 5 мл этой среды разливают в пробирки, в качестве источника углерода используют полоски фильтровальной бу­маги длиной 7—10 см. не содержащие крахмала (реакция с раствором Люголя). Полоски на 4—5 см должны выступать над средой. Стерилизуют при 0,5 атм. 30 мин.

Нитрифицирующие бактерии учитывают на жидкой среде Виноградского для бактерий первой фазы нитрифи­кации (см. 8.2.2). Среду разливают по 25 мл в колбы Эрленмейера на 100 мл и стерилизуют при 0,5 атм. 30 мин.

Денитрифицирующие бактерии выявляют на среде Гильтая. Готовят два раствора. Первый: KNO₃ — 2,1 г; аспарагин — 10 г; дистиллированная вода— 250 мл; второй: нитрат натрия – 5,0 г; КН₂РО₄ - 2,0 г; MgSO₄•7H,O - 2,0 г; CaCl₂ — 2,0 г; FeCl₃ — следы; дистиллированная вода — 500 мл.

Растворы сливают вместе, устанавливают рН 6,8—7,0, объем доводят дистиллированной водой до 1000 мл. Хорошие результаты получаются и на более простой среде (см. 8.3.1).

Анаэробные азотфиксаторы (Clostridium pasteurianum) учитывают на среде Виноградского (см. 8.4.3). Источни­ком углерода в ней служит глюкоза — 20,0 г на 1 л дистилли­рованной воды. Среду разливают по 9 мл (на ½ пробирки). Перед стерилизацией в пробирки опускают опрокинутый вверх дном поплавок для улавливаниягазов (см. 6.2.3).

Для определения качественного состава почвы и отно­сительной опенки населенности почвы аэробными целлюлозоразрушающими микроорганизмами используют гелевые пластины или пластины из «голодного» агара.

На пластину помешают кружок стерильной фильтроваль­ной бумаги, увлажненной стерильной средой Виноградского (см. 7.2.1) или средой Гетчинсона. Затем по фильтровальной бумаге раскладывают (по трафарету) 50 комочков почвы диа­метром 1—2 мм.

Среда Гетчинсона имеет следующий состав (г/л дистилли­рованной воды): NaNO₃ - 2,5; КН₂РО₄ - 1,0; MgSO₄•7H₂O - 0,3; NaCl — 0,1; СаС1₂ — 0,1; FeCl₃ — 0,01; рН среды доводят до 7,2 добавлением 20%-ного раствора Na₂CO₃

Нитрифицирующие бактерии выявляют на гелевых пластинах, пропитанных 5 мл питательной среды Виног­радского (см. 8.2.1) для первой или для второй фазы нитрифика­ции. Пластины подсушивают в сушильном шкафу при 40— 50 °С до образования блестящей (эмалевой) поверхности. По ней раскладывают комочки почвы диаметром 1—2 мм.

Азотобактер также хорошо выявляется на гелевых пластинах, пропитанных 3—5 мл питательной среды Виноград­ского (см. 8.4.3).

10.3. Определение численности различных групп микроорганизмов