Группы микроорганизмов, выявляемые на плотных средах

Состав и приготовление питательных сред для разных групп микроорганизмов

Материалы и оборудование

Стерильные стеклянные широкогорлые банки, закрытые, обернутыми стерильной бумагой, корковыми пробками; часовые стекла; фарфоро­вые чашки; фарфоровые ступки с пестиками; шпатели; ложки; колбы на 250 мл со 100 мл стерильной водопроводной воды — 1 (на человека); колбы на 250 мл с 90 мл стерильной водопроводной во­ды — 6 (на человека); 0,1%-ный раствор пирофосфата натрия Na₄P₂O₇; стерильные пипетки Мора на 10 и 1 мл; стерильные пробир­ки с 9 мл водопроводной воды; стерильные чашки Петри; питатель­ные среды.

Микроорганизмы, использующие органические формы азота, выявляют на МПА.

Для учета спорообразующих бактерий (по Мишустину) рекомендуют применять смешанный агар: МПА + сусло в соотношении 1:1. МПА готовят обычным способом, сусло-агар — из 7-баллингового сусла (рН 7,0) и 2% агара. Смешивают МПА и сусло-агар перед посевом и разливают в чашки Петри.

Почвенную суспензию из соответствующего разведения (10^-1 и 10^-2) пастеризуют перед посевом при 70 °С 15 мин. Ба­циллярных форм выявляется больше, если почву перед приго­товлением разведений подсушить при комнатной температуре. Микроорганизмы (в том числе актиномицеты), способные использовать минеральные формы азота, чаще выявляют на КАА, содержащем (г/л дистиллированной воды): крахмал (растворимый) — 10,0; (NH₄)₂SO₄ - 2,0; К₂НРО₄ – 1,0; MgSO₄•7H₂O - 1,0; NaCI -1,0; СаСО₃ — 3,0; агар— 20,0. Крахмал приливают к среде, предварительно растворив его в небольшом количестве воды.

Для выявления этой группы микроорганизмов можно ис­пользовать и среду Чапека следующего состава (г/л дистилли­рованной воды): сахароза или глюкоза — 20,0; NaNO₃ — 2,0; К₂НРО₄ - 1,0; MgSO₄•7H,O - 0,5; КС1 - 0,5; СаСО₃ - 3.0; агар – 20,0.

При изучении актиномицетов используют также среды с глюкозой.

Среда 1 (г/л дистиллированной воды): глюкоза — 14,0; СаСО₃- 0,7; KNO₃ - 0,7; MgSO₄ • 7Н₂О - 0,35; NaCI -0,35; К₂НРО₄ - 0,35; FeSO₄ • 7Н₂О - следы; агар - 20,0.

Среда 2 (г/л дистиллированной воды): глюкоза — 10,0; цитрат натрия – 11,2; КН₂РО₄ - 2,38; К₂НРО₄ - 5,65; (NH₄)₂SO₄- 2.64; MgCl₂•6H₂O - 1,21; ZnSO₄•7H₂O - 0,012; FeSO₄•7H₂O - 0,11; CuSO₄ - 0,006; MnCO₃ - 0,0012; агар – 20,0.

Микроорганизм, участвующие в минерализации гумусовых веществ, автохтонную (от греч. autochthon — местный, коренной) микрофлору обнаруживают на следующих средах.

1.Водный агар (по Эрскову): к 1 л водопроводной воды прибавляют 2—2,5% хорошо отмытого агара и 20 мин стерили­зуют при 120 °С.

2.Агаризованная почвенная вытяжка: к 1 л почвенной вытяжки добавляют 0,5 г К₂НРО₄ и 20—25 г агара. Среду сте­рилизуют при 0,5 атм. 30 мин.

Почвенную вытяжку лучше готовить по Фишеру, к 1 кг почвы с высоким содержанием гумуса прилипают 1 л 0,1%-ного Na ₂CO₃ и нагревают 30 мин в автоклаве при 115 °С. Вытяжку фильтруют через складчатый бумажный фильтр. Если фильтрат получается мутным, его осветляют кипячением с тальком и снова фильтруют. К 100 мл экстракта добавляют 900 мл воды.

3.На нитратном агаре, приготовленном по методу Виноградского, лучше выявляются представители автохтонной мик­рофлоры, так как нитрит ингибирует рост бациллярныхформ, подавляющих микроорганизмы автохтонной группы. Нитритный агар готовят следующим образом: к среде для второй фазы нитрификации (см. 8.2.2) добавляют 20 г/л хорошо вымочен­ного в дистиллированной воде агара и стерилизуют при 0,5 атм. 30 мин.

Азотобактер и олигонитрофильные микроорганизмы (в том числе дрожжи Lipomyces) учитывают на среде Эшби (см. 8.4.3).

Микроскопические грибы чаще обнаруживают на сусло-агаре, но можно использовать также кислую среду Ча­пека.

Для приготовления сусло-агара берут семибаллинговое сусло, разводят его в 3 раза водой и добавляют 2% агара. Среду стерилизуют 30 мин в автоклаве при 0,5 атм. или в кипятиль­нике Коха при 100 °С также 10 мин 3 раза через сутки (дробная стерилизация).

Перед добавлением к почвенной суспензии, внесенной к чашки Петри, расплавленного сусло-агара к нему приливают 2 мл стерильной молочной кислоты (на 1 л субстрата) пли 0,5 г стерильной лимонной кислоты.

При приготовлении среды Чапека для грибов в среде, подготовленной для выявления актиномицетов, двузамещенный фосфат калия заменяют эквивалентным количеством однозамещенного фосфата калия (см. выше).

Перед тем как расплавленную среду Чапека внести в чашки Петри, к ней добавляют 4 мл/л стерильной концент­рированной молочной кислоты.