Материалы и оборудование

Аммонификация мочевины

Материалы и оборудование

Питательная среда (МПБ + 3% пептона), цилиндры на 100 мл, колбы Эрленмейера на 100—150 мл, почва, полоски красной лакмусовой и фильтровальной бумаги, раствор ацетата свинца, вата для пробок, белые фарфоровые пластинки с лунками (или фарфоровые чашки), ре­актив Несслера. Микроскопы и все необходимое для приготовления окрашенных препаратов, пипетки, покровные стекла.

Приготовление реактивов.Ацетат свинца обрабатывают раство­ром NaOH до тех пор, пока осадок не растворится (0,25 М). Реактив Неслера готовят следующим образом: 20 г КI раство­ряют в 50 мл воды и к раствору добавляют до насыщения (око­ло 32 г) небольшими порциями HgI₂. После этого приливают 460 мл воды и вносят 134 г КОН. Отстоявшуюся жидкость сли­вают в темную склянку.

Реактив парадиметиламидобензальдегида содержит 4 г паради-метиламидобензальдегида, 30 мл 96%-ного этилового спирта, 80 мл концентрированной HCI

.

Мочевина — конечный продукт превращения соединений азота в организме человека и животных.

Бактерии, вызывающие аммонификацию мочевины, вы­рабатывают экзофермент уреазу, который гидролизует мочеви­ну до аммиака:

CO(NH₂)₂ + 2Н₂О = 2NH₃ + СО₂ + Н₂О

В качестве источника углерода они используют некото­рые углеводы и соли органических кислот.

Для наблюдения за процессом аммонификации мочевины можно использовать питательную среду следующего соста­ва (г/л дистиллированной воды): тартрат К или Na (виннокис­лые, можно соли яблочной кислоты) — 5,0; мочевина — 50,0; К₂НРО₄ - 0,5; MgSO₄ · 7H₂O - 0,2.

Среду разливают по 30 мл в колбы Эрленмейера на 100 мл, заражают почвой (или навозом) и ставят в термостат при 25—30 ºС. Для обнаружения аммиака, выделяющегося в атмосферу, под ватную пробку подвешивают полоску крас­ной лакмусовой бумаги, смоченную дистиллированной водой.

Через 3—5 сут. культуру подвергают анализу. Устанавли­вают выделение аммиака по посинению красной лакмусовой бумажки, а накопление его — капельной реакцией с реактивом Несслера (см. 8.1.1). К капле культуральной жидкости на фар­форовой пластинке добавляют каплю этого реактива. Образу­ется буроватый осадок.

Для изучения возбудителей аммонификации мочевины из едва заметной пленки на поверхности среды готовят препарат и окрашивают его фуксином. Чаще всего под микроскопом на­блюдают клетки Urobacillus pasteurii, реже — Planosarcina ureae.

Среда дли воспроизведения процесса аммонификации мочевины, ци­линдры на 100 мл, колбы Эрленмейера на 100 мл, почва, алюминиевые ложки, полоски красной лакмусовом бумаги, вата, белые фарфоровые пластинки с лунками, реактив Несслера, пипетки, микроскопы и все необходимое для приготовления препаратов и просмотра их под микроскопом.