Материалы и оборудование

Экспериментальная часть

Ревертация протопластов мицелиальных грибов

Ревертация бактериальных протопластов

Еслиприобработкелизоцимомилипенициллиномвизотоническойсредеклеточнаястенкасбактериальнойклеткиполностьюнеудалена, топриисключенииэтихагентовизсредыпроисходитбыстроевосстановлениеклеток. Еслижеклеточнаястенкаудаленаполностью, образовавшийсяистинныйпротопластнеспособенвобычныхусловияхеерегенерировать. Однимизусловий, позволяющихтакимформамревертироватькисходномусостоянию, являетсяналичиевсредекультивированиятвердойилиполутвердойосновы. Еюмогутбытьжелатин (5−30 %), агар (0,7−2 %),мембранныефильтры, убитыебактериальныеклеткииликлеточныестенки. Причемиспользованиетвердогосубстратапредпочтительнее.

Реверсиякмицелиальнымформамугрибныхпротопластовпроисходиткаквжидкой, такинаповерхноститвердойсреды, иливслоеполужидкогоагара. Многиеисследователипоказали, чтореверсиягрибныхпротопластовможетпроходитьтремяспособами, различающимисяхарактеромформированияпервичногомицелия.

Припервомспособепротопластыпервоначальнообразуютцепочкуиздрожжеподобныхклеток (до 20 клеток). Затемтерминальная, ужеосмотическиустойчивая, продуцируетпервичнуюгифу,образующуюмицелий. Второйспособреверсииначинаетсясрегенерациипротопластамиклеточнойстенки, вследствиечегоонистановятсярезистентнымикосмотическомушоку. Послечегопротопластобразуетзародышевуютрубку. Третийспособреверсиигрибныхпротопластовнеобычен. Протопласт, сохраняясферическуюформу, формируетновуюоболочкуввидеполочки, затемтудапереноситсясодержимоематеринскогопротопласта. Еслипоявляетсяцепочкатакихоболочек, тоцитоплазмапередвигаетсяпоэтойцепочке, оставляяпозадисебя«тени»изклеточныхстенок. Последняяклеткацепочкиобразуетпервичнуюгифу. Грибныепротопластымогутревертироватьоднимизтрехспособов, илиуодноговиданаблюдаетсявсетриспособареверсии. Трудносказать, чтовлияетнавыборспособареверсии, возможно, видовыеособенностиорганизма, типегоцитокинеза, методполученияиусловияинкубациипротопластовилисоставрегенерационнойсреды.

Растущиеиревертирующиепротопласты― хорошаямодельдляизучениябиосинтезаклеточнойстенкиивзаимоотношениймеждуростомиядернымделениемклетки.

Для проведения экспериментальной части данной курсовой работы были использованы следующие оборудование и материалы:

– стерильные пипетки;

– бумажные фильтры;

– стерильные чашки Петри;

– спиртовая горелка;

– спирт;

– спички;

– бактериальная петля;

– штатив для пробирок;

– суховоздушный термостат на 50 ºС;

– шпатели металлические;

– бумажные фильтры;

– стерильные пробирки;

– весы лабораторные;

– штатив-скашиватель;

– цилиндр мерный;

– дистиллированная вода;

–питательные среды для микроорганизмов (питательный агар, физиологический раствор, питательный бульон);

– культура микроорганизмов E. Coli;

– культура микроорганизмов Bacillus subtilis;

– соль СuCl₂·6H₂O;

– фотокалориметр и набор кювет.

Для обеспечения стерильности и правильности проведения эксперимента инструменты и питательные среды были предварительно простерилизованы в автоклаве.