Техника изготовления постоянных микропрепаратов

Фиксация и хранение материала

Сущность фиксации заключается в быстром умерщвлении клеток и тка­ней, при котором сохраняется их прижизненная структура, а все коллоиды переводятся в нерастворимое состояние и приобретают способность восприни­мать красители. Фиксацию осуществляют путем погружения материала в раз­личные ядовитые жидкости или в крепкий спирт.

Материал, заготавливаемый для гистологических исследований, обычно фиксируют 96%-м раствором этилового спирта и оставляют в нем на хране­ние. Однако для фиксации сильно одревесневших органов растений лучше взять 80%-й его раствор и через несколько дней добавить в банки с материа­лом глицерин (до ¹/з объема спирта). Материал для эмбриологических иссле­дований (бутоны цветков, пыльники), а иногда и для гистологических лучше фиксировать специальными жидкостями (например, уксусным алкоголем или фиксатором Чемберлена). По истечении срока фиксации такой материал сле­дует промыть тремя сменами 80%-го раствора этилового спирта и хранить в его растворе такой же концентрации.

Если срезы готовят из живого материала, то для лучшего действия кра­сителей их необходимо зафиксировать спиртом.

Органы растений и небольшие растения, которые предполагают использо­вать для демонстрации, фиксируют 4%-м раствором формалина и хранят в 2%-м его растворе или в смеси 2%-го раствора формалина со спиртом любой концентрации.

Окрашивание срезов

Наиболее тонкие срезы переносят в чистое часовое стекло, в которое на­ливают при помощи пипетки небольшое количество водного раствора краси­теля. Через несколько минут (это зависит от концентрации красителя) краси­тель удаляют и срезы несколько раз промывают водой или 50%-м раствором этилового спирта до полного удаления лишней краски. Желательно контроли­ровать это под микроскопом!

Заключение срезов в глицериножелатин

Окрашенные и промытые срезы переносят по одному на предметные стек­ла в заранее подготовленные капли расплавленного глицериножелатина. Удоб­но брать срезы и переносить их на миниатюрной деревянной лопаточке, ко­торую можно легко изготовить, зачистив ножом второй конец кисточки или деревянную палочку.

В процессе работы следует подогревать предметные стекла с каплями глицериножелатина под настольной электрической лампой или на чашке с горя­чей водой, закрытой большим стеклом. Другую каплю глицериножелатина наносят на чистое покровное стекло и аккуратно накрывают им срез. При этом под покровным стеклом не должно остаться пузырьков воздуха. Избыток глицериножелатина, выступивший из-под покровного стекла, удаляют кусоч­ком фильтровальной бумаги. После застывания среды препарат готов. Реко­мендуют подчистить края покровного стекла и окантовать лаком, олифой или нитроэмалевой краской, что удлинит срок годности препарата.

Заключение срезов в канадский бальзам

Перед заключением окрашенных срезов в канадский бальзам их обезво­живают спиртом и пропитывают растворителем бальзама — ксилолом. Все не­обходимые операции со срезами осуществляют в одном или нескольких часо­вых стеклах, применяя пипетки и деревянные лопаточки.

В часовом стекле с окрашенными срезами сначала заменяют воду на 36%-й раствор этилового спирта. Для лучшего обезвоживания спиртовой раствор ме­няют два-три раза, затем заменяют его на абсолютный спирт, абсолютный спирт — на карбоксилол, а последний — на чистый ксилол. Смену ксилола проводят два-три раза. Из ксилола при помощи деревянной лопаточки один или? несколько срезов переносят на чистое предметное стекло, наносят на них каплю канадского бальзама и накрывают чистым покровным стеклом. Рекомендуют и на покровное стекло нанести небольшую каплю бальзама, что будет препятствовать появлению пузырьков воздуха под ним. Избыток канадского бальзама, который вытекает из-под покровного стекла, удаляют при помощи фильтровальной бумаги. После высыхания бальзама препарат готов для исследований.

Изготовление временных препаратов

При изготовлении временных препаратов изучаемый объект помещают на предметное стекло в каплю воды или глицерина, раствора реактива или красителя и накрывают покровным стек­лом. Такой препарат хранят не более месяца.

Препараты, которые можно хранить более длительный срок,называют постоянными.

Литература :8, с.185-188

Контрольные вопросы:

1 Назовите детали оптического микроскопа и какую роль они выполняют

2 Расскажите о последовательности работы с оптическим микроскопом

3 Как можно узнать увеличение объекта?

4 На каком расстоянии от изучаемого объекта должен находиться малый и большой объективы?

5 Какую сторону зеркала используют для нахождения света в различных условиях работы?