Реакция связывания комплемента

Алгоритм постановки реакции

Реакция непрямой гемагглютинации

Используется для серодиагностики. Реакция высокочувствительная и специфичная. Компоненты:

1. Исследуемая сыворотка перед работой инактивируется, т. е. прогревается при 56 градусах 30 минут.

2. Эритроцитарный диагностикум (эритроциты с адсорбированными на нерастворимым антигеном определенного вида микроорганизма).

3. Физиологических раствор.

1. Исследуемую инактивированную сыворотку развести, начиная от 1:10 до 1:1280

2. По 0,25 каждого разведения внеси в лунки планшета

3. В каждую лунку добавить по 2 капли эритроцитарного диагностикума.

Термостатировать 30 минут или выдержать 45 минут при комнатной температуре.

Контроли:

1. 0,25 мл иммунной сыворотки, заведомо родственной эритроцитарному диагностикуму + две капли эритроцитарного диагностикума.

2. 0,25 мл нормальной сыворотки + 2 капли эритроцитарного диагностикума

3. 0,25 мл исследуемой инактивированной сыворотки + 2 капли нормальных эритроцитов.

Все контроли помещаются в термостат на 30 минут или выдерживаются 45 минут при комнатной температуре.

Учет реакции начинается с контролей:

1. В первом контроле произойдет агглютинация - «зонтик»

2. Во втором и третьем агглютинации не будет - «пуговка»

3. В рабочих лунках будет «зонтик» или «пуговка» - положительная или отрицательная реакции.

Знать:

1. Общую характеристику РСК

2. Характеристику компонентов, участвующих в РСК

3. Подготовку компонентов к постановке реакции

4. Постановку основного опыта РСК

5. Методику оценки результатов РСК

6. Применяемые дез. средства, и концентрацию и назначение.

Уметь:

1. Подготовить рабочее место к работе

2. Принять, зарегистрировать, закодировать поступивший материал

3. Получить сыворотку, оценить ее пригодность.

4. Приготовить гемолитическую систему, повысить ее чувствительность

5. Поставить основной опыт РСК

6. Провести учет РСК, оформить документацию выдачи результатов

РСК обладает высокой чувствительностью и специфичностью, что позволяет использовать ее для серодиагностики многих заболеваний: бактериальных, риккетсиозных и вирусных. Реакция проходит в две фазы:

1. Специфическая фаза. В ней участвуют: сыворотка больного, антиген (корпускулярный или молекулярный), комплемент и физ. раствор.

2. Индикаторная фаза. В ней участвует гемолитическая система (равные объемы гемолитической сыворотки и взвеси эритроцитов барана).