Алгоритм постановки реакции
Реакция торможения гемагглютинации
Алгоритм постановки РГА
Реакцию ставят в лунках полистероловых планшет или в пробирках
1. Исследуемый материал на наличие вируса развести физ. раствором начиная от 1:10 до 1:1280 (разводим в пробирках).
2. Каждого разведения по 0,5 мл перенести в лунки планшет.
3. К каждой лунке добавить по 0,5 мл 1-2% взвесь эритроцитов.
Контроль:
1. Контроль эритроцитов — 0,5 мл эритроцитов + 0,5 мл физ. раствора.
Учет результатов начинаем с контроля:
1. При положительной реакции на дне лунок (пробирок) выпадает осадок эритроцитов в виде «зонтика»: рыхлый, с рваными краями.
2. При отрицательной реакции эритроциты образуют плотный осадок с ровными краями - «пуговка». Такой же осадок должен быть в контроле.
Титром вируса является максимальное разведение материала, в котором проходит агглютинация.
Используется для определения вида вируса в исследуемом материале. Компоненты:
1. Иммунная видовая противовирусная сыворотка.
2. Материал, исследуемый на наличие вируса
3. 1-2% взвесь эритроцитов
4. Физ. раствор.
Иммунная видовая противовирусная сыворотка нейтрализует вирус, имеющийся в материале, в том случае, если они родственны. Нейтрализованный вирус не способен выделять вещества, склеивающие эритроциты и агглютинация их не происходит. По примененной видовой сыворотке устанавливаем вид вируса в материале. Реакция высоко специфична.
1. Видовую противовирусную сыворотку развести от 1:10 до 1:2560
2. По 0,25 мл каждого разведения сыворотки внести в лунки планшета
3. В каждую лунку добавить по 0,25 мл материала, содержащего вирус, разведенного в 4 раза меньше титра, установленного в РГА.
4. После термостатирования в каждую лунку добавить по 0,5 мл — 1-2% взвесь эритроцитов.
5. Поместить в термостат на 30 минут, или выдержать 45 минут при комнатной температуре.
Реакция сопровождается тремя контролями:
1. Контроль сыворотки: 0,25 мл сыворотки (1:10) + 0,25 мл физ. раствора поместить в термостат на 30 минут. Добавить 0,5 мл 1-2% взвеси эритроцитов и поместить в термостат на 30 минут или выдержать 45 минут при комнатной температуре.
2. Контроль антигена: 0,25 материала с искомым вирусом +0,25 мл физ. раствора поместить в термостат на 30 минут. Добавить 0,5 мл 1-2% взвеси эритроцитов и поместить в термостат на 30 минут или выдержать 45 минут при комнатной температуре.
3. Контроль эритроцитов: 0,5 физ. раствора поместить в термостат на 30 минут. Добавить 1-2% взвесь эритроцитов, поместить в термостат на 30 минут или выдержать 45 минут при комнатной температуре.
Учет реакции начинается с контролей. Во всех контрольных лунках «пуговки» - торможение гемагглютинации. В рабочих лунках: если сыворотка не подошла вирусу, то в лунках «зонтики». Титр сыворотки — это ее максимальное разведение, в котором происходит задержка гемагглютинации.