Постановка пробы на токсикогенность
Алгоритм постановки реакции преципитации методом двойной диффузии по Оухтерлони
Реакция преципитации в агаре (в геле)
Основана на способности антигенов и антител диффундировать в толще агара. При встрече антигена с соответствующим антителом в агаре образуется преципитат в виде дуг преципитата. По способу внесения в агар антигена и антител различают:
1. Метод простой диффузии — сыворотку вносят в расплавленный и охлажденный агар, а антиген — в лунки агара (делают металлическими цилиндрами — матриксами)
2. Метод двойной диффузии по Оухтерлони — сыворотки и антитела вносят в лунки агара или на агар накладывают бумажные диски пропитанные сывороткой и антигеном.
3. Определение токсикогенности бактерий — антитоксическую сыворотку наносят на бумажную полоску, а в качестве антигенов используют выделенную культуру для выявления экзотоксина.
В чашке с агаром матриксом делают лунки, заливают вторым слоем агара и в лунки добавляют:
1. Первая лунка — преципитирующую сыворотку (опыт)
2. Вторая лунка — нормальную сыворотку (контроль)
3. Третья лунка — известный антиген (контроль)
4. Четвертая лунка — исследуемый антиген
Учет через 24-48 — дуги преципитации между 1,3 и 1,4 лунками.
Основана на диффузии экзотоксина (антигена) бактерий и антитоксической сыворотки (антитела) в агаре с образованием комплекса антиген+антитело в виде дуг преципитации.
Позволяет выявить образование экзотоксина бактериями (дифтерийная палочка). Компоненты реакции преципитации:
1. Выделенная культура (для определения наличия экзотоксина)
2. Токсигенная культура (контрольная) — известный антиген
3. Антитоксическая сыворотка к контрольной культуре — известные антитела.