Получение составных частей крови

Отбор и подготовка к опыту животных

Из карантинного отделения отбирают здоровых животных и рассаживают в клетки, банки (белых мышей по 5-8 штук, кроликов по 1-2). Несколько дней проводят ежедневное взвешивание, термометрию (утром и вечером). Термометр вводят в прямую кишку на строго определенную глубину (2-3 см) и измеряют в течение 5 минут.

Накануне опыта животных маркируют: мелких — красками (спиртовой раствор фуксина, пикриновой кислоты). Для более крупных животных используют алюминиевые пластинки с номерами. Предварительно их выдерживают в 70% этиловом спирте 2-3 часа. Перед закреплением пластинки в ухе его протирают этиловым спиртом.

Иммобилизация животных ручная или в специальном станке. Заражают накожным, внутрикожным, подкожным, внутримышечным, внутривенным и другими способами. После заражения помещают в клетки, банки, ставят в заразное отделение и ведут наблюдение определенный срок. После гибели животное вскрывают и оформляют протокол вскрытия.

Животные являются донорами крови, которая используется для лабораторных работ. Доноры могут быть многоразовые (крупные животные — кролики, лошади) или одноразовые, с полным обескровливанием (белые мыши, крысы). Кровь берут из вен, уха, хвоста, сердца, яремной вены.

1. Получение дифибринированной крови: кровь помещают в стерильную баночку со стеклянными бусами и энергично встряхивают 15-20 минут, при этом фибрин оседает на бусах в виде сгустка. Свободную от фибрина кровь переливают в стерильную посуду.

2. Получение цитратной крови: к крови добавить 5% раствор цитрата натрия в соотношении 1:10 (на 10 мл крови 1 мл 5% раствора цитата натрия).

3. Получение плазмы: цитратную кровь центрифугируют или отстаивают в холодильнике 18-20 часов. В результате над осадком образуется слой жидкости желтоватого цвета — плазма.

4. Получение взвести эритроцитов: получают из цельной или дифибринированной крови. Кровь центрифугируют 15-20 минут при 2000-3000 об/мин. Эритроциты оседают на дно, образовавшуюся над ними желтовато-красную жидкость сливают, а в пробирки добавляют стерильный физ.раствор до первоначального объема и вновь центрифугируют. Такое промывание эритроцитов проводят 2-3 раза, пока надосадочная жидкость станет бесцветной. Последнюю порцию надосадочной жидкости удаляют, а в пробирки остается взвесь эритроцитов, которую можно использовать 2-3 дня. Для сохранения эритроцитов на более длительный срок их обрабатывают формалином.

5. Получение сыворотки крови. Кровь берут натощак, не ранее шести часов. В сыворотке после еды может содержаться жир, который делает ее мутной и непригодной для исследования — такая сыворотка называется хилезной. При взятии крови необходимо соблюдать асептику. Взятую кровь оставляют на один час при комнатной температуре или ставят в термостат на 30 минут при 37 градусах для образования сгустка. Образовавшийся сгусток отделяют от стенок пастеровской пипеткой или обводят петлей. Пробирку помещают в холодильник обычно на один час, но не более 48, для лучшего отделения сыворотки из стоявшего на холоде сгустка. Затем сыворотку отсасывают пастеровской пипеткой с резиновым баллоном. Сыворотка должна быть совершенно бесцветной без примеси клеток, слегка соломенно-желтая без хилезности и признаков гемолиза. Сыворотку можно получить путем центрифугирования 15-20 минут, при 2000-3000 об/мин.

Сыворотка, получаемая от животных чаще бывает иммунной, то есть содержащей антитела против определенного вида возбудителя. Получают их путем иммунизации животного возбудителем. Определяют титр полученной иммунной сыворотки, то есть наибольшее ее разведение, в котором она реагирует с соответственным антигеном. Сыворотки готовят на производстве, разливая в ампулы с указанием их титра. Часто сыворотки высушивают, а перед употреблением растворяют физиологическим раствором до объема, указанного на этикетке. Хранят сыворотки при 4-10 градусах Цельсия. Нативные иммунные сыворотки могут быть адсорбированные и не адсорбированные. Не адсорбированные сыворотки не очищены: содержат групповые антитела, то есть антитела к микроорганизмам, имеющим общие антигены. Их используют в серийных разведениях, указанных на этикетке. Адсорбированные — очищенные от посторонних антител.