Количество учебных часов - 6 часов
ЗАНЯТИЕ 6
ТЕМА "Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных заболеваний человека. Заключение по результатам исследования.
lV день исследования"
Актуальность темы:
Основой микробиологического диагноза, значение которого при диагностике гнойно-воспалительных заболеваний исключительно велико, является подведение итогов всех анализов, проведенных с исследуемым материалом, взятым от больного.
Последовательное изучение морфологических, культуральных, биохимических признаков микробов, выделенных в монокультуре или в ассоциации - это этапы идентификации микробов, завершить которую следует определением серовара (фаговара, в случае необходимости).
Особую роль играет клиническая микробиология в применении эффективной антимикробной терапии больных с ГВЗ.
Цель занятия:
Студент должен знать:
Способы и порядок изучения биологических признаков основных возбудителей ГВЗ. Знать правила изучения биохимической активности микробов. Должен дать оценку количеству выделенного возбудителя - какие количества микроба - возбудителя могут свидетельствовать о заболевании, какие - о бактерионосительстве. Должен знать о динамике микробной обсемененности патологического материала в процессе инфекции, в процессе лечения больного. Должен знать о способах определения антибиотикочувствительности / устойчивости возбудителя, о сути стандартов, предложенных KCCLS для контроля за качеством определения отношения УПМ к антибиотикам.
Студент должен уметь:
Выбрать необходимые тесты (используя официальные схемы) для идентификации основных возбудителей ГВЗ. Должен уметь описать морфологию основных возбудителей ГВЗ. Провести исследование антибиотикочувствительности микроба методом диффузии в агар и оценить результаты этого исследования. Составить заключение о видовой (родовой) принадлежности выделенных микроорганизмов, правильно написать видовое название микроба.
Аннотация:
1. Идентификация микроба до вида и количественный подсчет микроорганизмов, выделенных из патологического материала, взятого от больного - вот важнейшая задача микробиологических клинических исследований. На основании квалифицированно сделанной работы устанавливается диагноз.
В предыдущих занятиях были подробно описаны действия, которые
предпринимает микробиолог на первых этапах идентификации возбудителя -
изучение морфологии (по мазку), изучение характера выросших колоний и
определения чистоты выделенных культур.
2. При изучении других биологических признаков возбудителя необходимо провести тесты на ферментацию углеводов, белков, жиров ("пестрый ряд"), выявление пигмента, гемолизина, коагулазы, лецитиназы, возможности роста микроба в экстремальных условиях, требовательности к питательным средам и пр. Так, например, для отличия (дифференциации) E.coli от родственных грампотрицательных микробов (Salmonella, Klebsiella, Proteus и др - см. табл. 5,занятие 5), следует использовать тесты на образование индола, сероводорода, оксидазы,уреазы, рост на цитратной среде Симмонса на дифференциальной среде Эндо и т.д.
От этой группы грамотрицательных палочек, относящихся к семейству Enterobacteriaceae, отличаются своими свойствами, тоже грамотрицательные гемофильные палочки (табл. 6), синегнойные палочки (табл.7) - представители других семейств.
Порядок выполнения (методика) многочисленных тестов, а также учет положительных и отрицательных результатов, описан в специальных руководствах, справочниках, определителях, атласах и пр. В настоящее время техника лабораторных работ изменилась - появилась аппаратура для автоматического, полуавтоматического определения многих тестов, разработаны компьютерные программы для учета результатов, полученных с помощью тестов.
Так, разработаны системы пластмассовых панелек с ячейками, в которых подобраны комплекты необходимых ингредиентов с индикаторами (типа: Enterotest, ATBUR-Klebsiella pneumonia, ATB G-Salmonella, ATB Fungus - Candida albicans, API Campy, Mycoplasma 1ST и т.д.).
Использование указанных систем заключается в закапывании взвеси изучаемой суточной культуры микроба в лунки панелек и термостатирование 7-10 часов. Считывание результатов производят с помощью автоматов, визуально, если нет аппарата. Обычно при ферментации углеводов, белков и пр., меняется цвет индикатора, накапливаются газообразные продукты. Гемолитическая активность микроба, регистрируется на кровяном агаре в виде зоны абсолютного гемолиза (b вокруг колонии, или в виде зоны позеленения кровяного агара a) Б или в виде отсутствия изменения среды и т.д.
Удобны в практических лабораториях "Системы индикаторных бумажек" для идентификации микроорганизмов (СИБ). Бумажные диски,полоски, содержат определенные количества субстрата в сочетании с индикатором. Они используются вместо сред Гисса, Пешкова. К каждой упаковке "Системы" приложена подробная инструкция по выполнению каждого теста (оксидаза, углеводы, b-галактозидаза, индол, уреаза, декарбоксилазы аминокислот, сероводород, цитрат натрия, желатиназа и др.)
3. Регистрация результатов определения чувствительности /устойчивости возбудителей к антибиотикам очень ответственный этап работы. Он направлен на обнаружение наиболее эффективно действующих на возбудителя
Рис. 4.
Схема проверки антибиотикочувствительности, устойчивости
стафилококков методом дисков (диффузии антибиотика в агар)
1. Диск с пенициллином - 20мм
2. Диск с цефалотином - 29 мм
3. Диск с сизомицином - 10 мм
4. Диск с эритромицином - отсутствует зона
5. Диск со стрептомицином - отсутствует зона
препаратов, определение средств, способных заменить отсутствующие препараты, разработку оптимальных схем терапии больных.
Если от больного выделены не монокультуры, а ассоциации, то чувствительность должна определяться для каждого вида микроорганизмов отдельно. Это важное правило.
Однако, в крайних случаях, если интересы больного требуют, то по согласованию с лечащим врачом, бактериолог может прибегнуть к ориентировочному, ускоренному (в течение суток) анализу чувствительности к антибиотикам, без выделения культуры возбудителя, при помещении дисков в чашки с первичным посевом патологического материала.
Методика регистрации чувствительности микробов к антибиотикам сводится к измерению (в мм) диаметра зоны отсутствия микробного роста на среде в чашке Петри. Для этого используют простую линейку, измерение осуществляется через диаметр диска (см. рисунок 3).
После установления размеров зон отсутствия роста, следует сравнить
полученные данные со значениями диаметров зон задержки роста в специальных таблицах (см. табл. 6, занятие №5). Соответственно сравнению определить отношение микроба (например, стафилококка) к антибиотикам
- Устойчивый - к эритромицину, стрептомицину, сизомицину;
- Умеренно устойчивый - к пенициллину;
- Чувствительный - к цефалотину.
Разработаны специальные таблицы по чувствительности различных видов
бактерий к противомикробным лекарственным средствам (табл.2). Их можно использовать для решения вопроса какие антибиотики могут быть использованы для лечения больных ГВЗ.