Количество учебных часов - 6 часов

ЗАНЯТИЕ 4

ТЕМА "Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных заболеваний человека. Количественный метод. ll день исследования"

Актуальность темы:

Перечень гнойно-воспалительных заболеваний включает свыше 100 наименований. Нет ни одного органа, ни одной ткани, систем организма людей разных возрастов, которые при определенных условиях не могли бы быть поражены условно-патогенными микроорганизмами. Несмотря на то, что УПМ входят в состав микробных биоценозов здоровых людей (нормоценоз), а также широко обсеменяют объекты окружающей среды, при ослаблении организма они могут вызвать ГВЗ. Выделить УПМ из организма больного, установить их этиологическую роль в каждом конкретном случае - задача клинического микробиолога. Для этого используют классические методы микробиологических исследований, в частности - бактериологический, микроскопический, серологический, если есть необходимость - биологический.

Цель занятия:

Студент должен знать:

Перечень основных микроорганизмов, относящихся к УПМ, способных вызвать ГВЗ. В каких патологических материалах можно выявить УПМ. Какие методы следует использовать для установления этиологии ГВЗ. Какие существуют этапы микробиологических исследований патологических материалов, взятых от больных, что следует делать с материалом в первый, второй день исследования. С какой целью производят посев материала на питательные среды. Какие признаки имеют колонии основных УПМ.

Студент должен уметь:

Изучить визуально под микроскопом (объектив х8) признаки выросших на различных (МПА, КА, ЖСА, среда Эндо, среда Сабуро, ША, бульон и др.) питательных средах основных возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний (E.coli, Serratia, Proteus, Klebsiella, Ps. aeruginosa, S.aureus, S.epidermidis, S.pyogenes, S.viridans, S.pneumoniae, H.influenzae, грибы Candida, Penicillium, Aspergillus, Mucor). Должен описать край, поверхность, консистенцию, прозрачность, цвет колоний указанных микроорганизмов. Подобрать питательные среды (плотные, жидкие) и пересеять изолированную колонию на скошенную плотную питательную среду и бульон. Должен уметь подсчитать число колоний, выросших при количественном посеве материала (и выразить это в цифрах = КОЕ/г, КОЕ/мл, КОЕ/тампон).

Аннотация

Микробиологические исследования патологического материала, взятого от больного с ГВЗ (см. Занятие 3), включают:

1 день исследования состоит из:

- Визуального изучения материала, регистрации наличия патологических примесей (гной, слизь, кровь, кристаллы и др.)

- Приготовление мазка (мокрота, отделяемое из зева, носа, влагалища, уретры, раны и т.д.)

- Окраска мазка по методу Грама, если нужно - Циля-Нильсена (мокрота), Нейссера (отделяемое зева, носа), Романовского-Гимза (отделяемое из влагалища, уретры), метиленовой синью, по Гинс-Бурри (мокрота) и др.

- Микроскопия мазка и поиск возможных возбудителей ГВЗ (а также обязательно поиск в мокроте M.tuberculosis, окрашенных по Цилю-Нильсену)

- Посев исследуемого материала на оптимальные питательные среды (ориентировочно в поиске сред, может оказать помощь микроскопия материала). Посев может быть осуществлен для качественных исследований, при которых должен быть выделен микроб-возбудитель, и может быть сделан количественный посев для учета степени обсемененности патологического материала возбудителем (см. Занятие 3).

Посевы термостатируются или в аэробных, или в анаэробных условиях, обычно при 37оС.

Во 2 день исследования производят следующую работу:

- Извлекают чашки с посевами патологического материала из термостата (или / и анаэростата), изучают характер выросших колоний визуально и под микроскопом (объектив х8). Учитывают величину колонии, край, характер поверхности, прозрачность, консистенции, цвет, характер изменения питательной среды вокруг колонии (например, наличие на кровяном агаре b-гемолиза или a-гемолиза, на ЖСА радужный венчик вокруг колоний S.aureus; на МПА - синий, зеленый, желтый пигменты вокруг колоний Ps.aeruginosa и т.д.). Запах исходящий от посевов (E.coli - фекальный; Ps.aeruginosa сладковато-приторный, жасминный; Proteus - тошнотворный гнилого мяса; H.influenzae - "мышиный" или закисшей посудной тряпки; Candida - молочнокислый и пр.).

- Из "подозрительных" на рост определенного вида микроба колоний делают мазок, окрашивают по Граму, микроскопируют.

- "Подозрительную" и изолированную от другого роста колонию, похожую на Staphylococcus? Streptococcus, E.coli, Ps.aeruginosa и т.д.) с помощью бактериологической петли снимают и пересевают на скошенный в пробирках агар, или сектор, подходящей плотной питательной среды в чашке Петри. Это делают для выделения чистой культуры микроба - возбудителя ГВЗ.

- Если посев патологического материала производили для количественных исследований, то после микроскопии мазка из "подозрительных" колоний, производят их подсчет (а также подсчет колоний УПМ - ассоциантов, вырастающих на чашке обычно в меньших количествах), а также пересчет в КОЕ/Г, КОЕ/мл, КОЕ/тампон - см. схему и пример расчета.

Пример расчета:

При количественном посеве мочи, взятой от больного с хроническим пиелонефритом (0,1 мл мочи засеяно на чашку с мясопептонным агаром), через 24 часа термостатирования при 37оС выросло 20 колоний двух типов.

Из них 16 колоний (через 2 суток наблюдения) имели для Рs.aeruginosa вид. Они были средних размеров, с неровным краем, гладкой, блестящей, влажной поверхностью, плоские, непрозрачные, легко снимались с агара петлей. Агар вокруг колоний и под ними был окрашен в сине-зеленый цвет. От колоний исходил приторно-сладкий аромат. Другие 4 колонии были похожи на E.coli. Они были крупными, серо-белыми, полупрозрачными, влажными, со слабовыпуклой блестящей поверхностью, ровным краем, легко снимались с агара бактериологической петлей. От колоний исходил фекальный запах.

В мазке с окраской по Граму обнаружены средней величины, бессистемно расположенные грамотрицательные палочки. При проверке колоний на оксидазу (тест-полоска), зарегистрирована положительная реакция.

В мазке из колонии, с окраской по Граму, обнаружены грамположительные, средних размеров, довольно толстые палочки, расположенные бессистемно. При проверке колонии на оксидазу (тест-полоска), зарегистрирована отрицательная реакция.

Расчет производится в двух вариантах.

1. По формуле А = х . 10, если исследуемый материал был жидким (моча, слюна и пр., или была исследована "отмывочная жидкость" после отмывания материала с тампона в 1 мл физ. раствора).

При этом: А - это КОЕ/мл (КОЕ/тампон)

х - это количество выросших колоний

Рис. 3

СХЕМА