Лабораторно- практическое занятие № 9

Тема: Микрофлора воздуха. Учет численности КОЕ в воздухе

Цель работы:Ознакомить студентов с методом оседания микробов по Коху.

Клетки микроорганизмов, попав в питательную среду, начинают размножаться и образуют видимые невооруженным глазом колонии. Каждая колония на чашке с питательной сре­дой вырастает из одной колониеобразующей единицы (КОЕ), ко­торая может представлять собой бактериальную, дрожжевую клетку, спору, кусочек мицелия актиномицета или гриба. Че­рез 48 ч инкубации чашки вынимают из термостата и предва­рительно подсчитывают число колоний. В связи с тем, что су­ществуют медленнорастущие формы бактерий, окончательный подсчет делают на 5-е сут.

Иногда клеток так много, что развившиеся колонии микроорганизмов сливаются, что часто наблюдается в чашках при разведении 10^-2. При высоких разведениях вырастают единичные колонии (меньше 10 на чашке), которые могут образоваться от случайно попавших клеток из воздуха при внесении в чашку почвенной суспензии или питательной среды. Учет та­ких чашек сделает подсчет недостоверным. Для правильного определения численности КОЕ подсчитывают только чашки, в которых колоний свыше 10 и не более 250—300 (в последнем случае при условии, если колонии очень мелкие).

При подсчете колоний чашки просматривают в проходящем свете и, чтобы дважды не учитывать одни и те же колонии, подсчитанные отмечают чернилами или тушью. Чтобы не пропустить мелкоточечные колонии, чашки дополнительно просматривают под лупой. Бывают случаи, когда в последнем разведении (10^-6) число колоний значительно больше 300. Такой посев желательно повторить, увеличив число разведений. Если это невозможно, подсчет выполняют, учитывая, что он дает представление лишь о минимальной численности микроорганизмов в почве.

Для определения количества КОЕ в воздухе можно ис­пользовать и более простой, но менее точный метод Коха (осаждение клеток микроорганизмов на плотных питательных средах). Суть его сводится к следующему. Стерильные чашки Петри с питательной средой (МПА, МПЖ или кусок вареной картофелины) открывают в исследуемом помещении (или на исследуемой площади) на 5 мин. Частицы пыли с бактериями под действием силы тяжести оседают на поверхность плотной питательной среды. Через 48 ч инкубации при 28—30°С осев­шие бактерии образуют на среде колонии, которые можно подсчитать (см. 5.1.1). Поскольку некоторые микроорганизмы развиваются медленно, окончательно подсчитывают колонии на 5-е сут.

На площади в 100 см² за 5 мин осаждается примерно столько клеток, сколько их находится в 10 л воздуха (0,01 м³). Зная площадь чашки Петри, можно подсчитать количество клеток в 1 м³ воздуха. Для этого число колоний, выросших в чашке Петри, относят к общей площади чашки, затем пере­считывают, сколько таких колоний поместилось бы на 100 см² и далее - в 1 м³ воздуха.

Пример расчета. В чашке Петри диаметром 10 см выросло 45 колоний. Площадь чашки (πr²) составит 3,14 * 5² = 78,5 (см²).

Далее подсчитывают число клеток на 100 см² (равнозначных 10 л, или 0,01 м³ воздуха):

78,5 см² воздуха содержат 45 клеток

100,0 см² » » х

Х= 100*45 =57(клеток)

78,5

Таким образом, в 0,01 м³ воздуха находится 57 клеток, а в 1 м³ их будет в 100 раз больше — 5700.

Контрольные вопросы:

1. Что такое микрофлора воздуха?

2. Каким образом исследуют микрофлора воздуха?

3. Что такое колониеобразующая единица (КОЕ)?

4. Определение КОЕ воздуха методом Коха.