Дополнительный материал к занятию
План изучения темы
Исходный уровень знаний
ИНФЕКЦИЯ. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ
ЗАНЯТИЕ 13
Освоение вопросов инфекции необходимо врачу для понимания патогенеза инфекционных заболеваний. Экспериментальный метод исследования в микробиологии применяется для изучения патогенности микроорганизмов, для выделения чистой культуры возбудителя из исследуемого материала, для испытания лечебного и профилактического действия химиотерапевтических и биологических препаратов.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать:
- понятие об инфекции, формы инфекции;
- понятие о патогенности и вирулентности микроорганизмов, факторы вирулентности и способы их выявления;
- правила заражения и вскрытия животных.
Для усвоения материала студенту необходимо знать:
- виды симбиоза макро– и микроорганизмов;
- основные группы микроорганизмов из разделов «Морфология микроорганизмов», «Физиология микроорганизмов»;
- приготовление препаратов–мазков, окраска их по Граму.
Цель занятия
1. Ознакомиться с методами выявления факторов патогенности микроорганизмов.
2. Изучить особенности и динамику развития инфекционного процесса, формы его проявления, пути передачи.
3. Познакомиться с основными методами экспериментального заражения и бактериологического исследования трупов животных.
1. Инфекция и инфекционный процесс.
2. Патогенность и вирулентность микроорганизмов. Факторы патогенности.
3. Экспериментальное заражение животных. Определение вирулентности микробов и силы токсина.
4. Роль макроорганизма, внешней и социальной среды в возникновении и развитии инфекционного процесса.
5. Динамика развития инфекционного процесса. Виды инфекционного процесса.
После изучения темы студент должен уметь
1. Соблюдая правила асептики, провести бактериологическое исследование трупа лабораторных животных.
2. Определить форму инфекционного процесса у экспериментального животного при бактериологическом исследовании трупа.
Методы изучения факторов вирулентности бактерий и силы токсинов
1. Биологические пробы на лабораторных животных для определения силы токсина (дерматонекротическая проба на лабораторных животных, кератоконъюнктивальная проба, определение DLM токсина).
2. Посев культуры на кровяной агар для определения продукции гемолизинов.
3. Определение ферментов, обусловливающих инвазивность бактерий:
· плазмокоагулаза определяется в реакции плазмокоагуляции с цитратной кроличьей плазмой;
· гиалуронидаза определяется по способности культуры гидролизовать гиалуроновую кислоту;
· лецитиназу определяют на среде ЖСА (желточно-солевой агар) по наличию венчика вокруг колонии;
· ДНК-азу определяют на питательной среде, в которую добавляют раствор ДНК, по просветлению среды вокруг колонии после нанесения на поверхность среды HCl.
4. Определение факторов персистенции микроорганизмов (антилизоцимной, антикомплементарной, антитрипсиновой, антиинтерфероновой, антикарнозиновой, антитромбоцитарной, антииммуноглобулиновой, антигистоновой активности).
Заражение лабораторных животных проводят для:
· моделирования инфекционных заболеваний;
· выделения чистой культуры возбудителя болезни:
· определения факторов вирулентности и измерения летальной дозы;
· проверки качества вакцин, иммунных сывороток, фармпрепаратов, антибактериальных препаратов.
Заражение животных производят разными способами (подкожно, внутрикожно, накожно, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно, через рот, в мозг, интраорбитально и др.) в зависимости от задач исследования и используемых животных.
Контрольные вопросы
Формы симбиоза микро– и макроорганизма. Дайте определение понятий «инфекционный процесс» и «инфекционное заболевание». Условия, от которых зависит возникновение, течение и исход инфекционного процесса. Перечислите положения «триады Генле-Коха». Что такое патогенность микроба? Вирулентность микробов, единицы её измерения. Какая разница между понятиями патогенность и вирулентность микробов? Какой микроб более вирулентен: с DLM 1 миллиард микробных клеток или с DLM 250 млн. микробных клеток? Как можно понизить вирулентность микробов? Как повысить вирулентность микробов? Дайте определение: факультативные внутриклеточные паразиты и облигатные внутриклеточные паразиты, приведите примеры. Факторы вирулентности микробов. Что такое адгезивность микробов и с какими факторами связано это свойство? Что такое инвазивность микробов и с какими факторами связано это свойство? Что такое антифагоцитарная активность микробов и с какими факторами это связано? Какие факторы обеспечивают персистенцию микроорганизмов в организме хозяина? Дайте характеристику экзотоксинов и эндотоксинов: образование, получение, химическая природа, сила действия, избирательность действия, антигенность, реакция на действие формалина и тепла. Анатоксин, его получение и основные свойства. Перечислите токсигенные бактерии. Пирогены бактериального происхождения, их характеристика, применение в медицине; в каких препаратах присутствие пирогенов является нежелательным? Как определяется пирогенность воды и растворов? Понятие об условно-патогенных микробах, примеры. Влияние состояния макроорганизма и условий внешней среды на течение инфекционного процесса. Возможные исходы заражения. Формы инфекционного процесса в зависимости от наличия клинических проявлений. Что такое экзогенная инфекция, эндогенная инфекция, аутоинфекция? Формы инфекции в зависимости от локализации возбудителя в организме хозяина, в зависимости от продолжительности взаимодействия возбудителя с макроорганизмом. Что такое рецидив, реинфекция, суперинфекция, вторичная инфекция? Понятие о бактериемии, септицемии, септикопиемии, токсинемии. Если ввести кровь больного ботулизмом человека в организм мыши, то она заболевает и погибает: чем вызывается гибель мыши? Как называется состояние организма, которое возникает у мыши? Укажите признаки, по которым инфекционные болезни отличаются от неинфекционных. Периоды течения инфекционного заболевания. Основные формы взаимодействия возбудителей при смешанных инфекциях. Перечислите основные особенности вирусных инфекций. Типы вирусной инфекции. Каким термином обозначается вирулентность вирусов? Определение понятия внутрибольничные (госпитальные) инфекции. Какие микроорганизмы (патогенные или условно-патогенные) чаще всего их вызывают? Определение понятия «госпитальные штаммы» и их основные свойства. Условия, способствующие возникновению внутрибольничных инфекций. В каких целях используется экспериментальный метод исследования? Какие животные чаще всего используются для экспериментов в микробиологических лабораториях? Правила отбора и подготовки животных для экспериментального заражения. Какие меры предосторожности следует соблюдать при заражении животных? Назовите методы заражения животных. Какова цель бактериологического исследования трупа экспериментального животного? Какие условия соблюдаются при бактериологическом исследовании трупа? Почему исследуемый материал не должен соприкасаться с дезинфицирующими веществами?
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Составьте схему «Основные факторы вирулентности микробов».
Работа студента на практическом занятии
1. Изучение факторов вирулентности микробов. Определение плазмокоагулазы: культуру стафилококка засеять в пробирку с цитратной плазмой кролика, в контроле оставить незасеянную плазму. Результаты учесть через два часа. В тетради описать ход опыта, результат и сделать вывод.
2. Изучение демонстрационных посевов стафилококков и стрептококков на кровяном агаре, объяснить причину образования зон гемолиза вокруг колоний.
3. По таблице определить DLM экзотоксина, записать в тетрадь. По таблице определить DLM и вычислить LD50 микробов. Записать в тетрадь.
4. Изучить схемы заражения экспериментальных животных.
5. Внимательно ознакомиться с процессом вскрытия трупа заражённого животного. Протокол вскрытия записать в тетрадь.