Комплемент
Комплемент представляет собой систему сывороточных белков. Известно не менее 18 белков, составляющих систему комплемента. Восемь из них являются индивидуальными белками, а один представляет комплекс: 4 белка системы пропердина, один — ингибитор фермента активатора. Согласно номенклатуре, принятой ВОЗ, система комплемента обозначается символом С, а ее индивидуальные компоненты символами Cl, C2 и т. д.
Каждая белковая фракция обладает определенными свойствами. Комплемент находится в сыворотке крови различных животных и человека, но наибольшее его количество обнаружено в сыворотке крови морских свинок, поэтому в практике препарат «комплемент» отождествляется с сывороткой морской свинки. В норме фракции комплемента находятся в неактивном состоянии. Они становятся активными в процессе многоступенчатых превращений, разделяемых на классический и альтернативный пути активации.
При классическом пути начальным активатором комплемента является комплекс антиген-антитело. Активируют систему комплемента IgM и большинство подклассов IgG (IgG1, 3) в большей степени, IgG2 — в меньшей.
При альтернативном пути активаторами являются полисахариды, в том числе зимозан и инулин, липополисахариды (эндотоксины), агрегаты – IgA. Дальнейший ход активации аналогичен классическому пути. (Схема 2)
В активном состоянии комплемент участвует в специфических иммунологических реакциях организма, при бактериолизе, ускоряет специфическую агглютинацию, преципитацию, усиливает, фагоцитоз, участвует в реакциях нейтрализации.
Активированные компоненты комплемента действуют в определенном порядке — в виде каскада ферментов, при этом продукт предшествующей реакции служит катализатором для включения в последующую реакцию компонента и субкомпонента. Комплемент является важным фактором гомеостаза и регулируется механизмами последнего.
Комплемент отличается от иммуноглобулинов тем, что его концентрация в сыворотке крови не повышается в результате иммунизации.
Содержание и уровень комплемента в крови можно использовать как тест, характеризующий состояние естественной резистентности макроорганизма: высокое содержание комплемента в крови считается благоприятным признаком; снижение уровня комплемента является отрицательным прогностическим показателем.
Для определения титра комплемента исследуемую сыворотку разводят и добавляют гемолитическую систему (смесь равных объемов эритроцитов барана и гемолитической сыворотки).
Таблица 10
Схема титрования комплемента
| пробирки
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1. Исследуемая сыворотка (1:10), мл
| 0,05
| 0,1
| 0,15
| 0,2
| 0,25
| 0,3
| 0,35
| 0,4
| 0,45
| 0,5
| –
|
2. Физ. раствор, мл
| 1,45
| 1,4
| 1,35
| 1,3
| 1,25
| 1,2
| 1,15
| 1,1
| 1,05
| 1,0
| 1,5
|
3. Гемолитическая система, мл
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
|
Пробирки инкубируют при 37°С 30 минут, встряхивая каждые 10 минут (табл. 10). Для контроля готовят разведения эритроцитов и дистиллированной воды: 0,1мл + 2,9мл (соответствует 20% гемолизу); 0,25мл + 2,75мл (соответствует 50% гемолизу); 0,35мл + 2,65мл (соответствует 70% гемолизу).
После инкубации содержимое пробирки центрифугируют при 1500 об/мин 5 минут и определяют пробирку, соответствующую 50% гемолизу. Количество комплемента, внесенное в эту пробирку, делят на исходное разведение и узнают какое количество неразведенной сыворотки дает этот феномен. Эта величина будет соответствовать 1 единице СН50. Вычисляют, сколько таких единиц будет в 1 мл неразведенной сыворотки.
Схема 2. Пути активации и физиологические функции компонентов
комплемента
Классический путь
Комплекс АГ – АТ (IgG, IgM)
|
Альтернативный путь
липополисахарид, IgА
|
В (протеиназа, образует комплекс С3вВ)
Р (стабилизатор комплекса С3вВ)
Д (активатор С3вВ в С3вВв)
|
Иммунное прилипание,
фагоцитоз
|
тучная клетка,
базофил,
тромбоцит
|
гистамин,
брадикинин,
серотонин,
лейкотриены
|
Острое воспаление, расширение кровеносных сосудов, транссудация
|
С5, 6, 7
несвязанный
комплекс
|
хемотаксис,
фагоцитоз,
активация лизосом
|
Мембраноатакующий комплекс
|