Люминесцентная микроскопия

Фазовоконтрастная микроскопия

Темнопольная микроскопия

Микроскопия в темном поле зрения основана на следующем принципе (рис. 15). Лучи освещают объект не снизу, а сбоку и не попадают в глаза наблюдателя, поле зрения остается темным, а объект на его фоне оказывается светящимся. Это достигается с помощью специального конденсора (параболоид), или обычного конденсора, прикрытого в центре кружком черной бумаги.

Рис. 15. Схема микроскопа для наблюдения в темном поле (Стейниер Р. и др., 1979).

Препараты для темнопольной микроскопии готовят по типу раздавленной капли. Исследуемый материал (бактериальная культура в физиологическом растворе) наносят на предметное стекло, которое покрывают покровным. Капля материала заполняет все пространство между покровным и предметным стеклом, образуя ровный слой. Темнопольная микроскопия используется для изучения живых неокрашенных микроорганизмов.

При прохождении пучка света через неокрашенный объект изменяется лишь фаза колебания световой волны, что не воспринимается человеческим глазом. Чтобы изображение стало контрастным необходимо превратить фазовые изменения световой волны в видимые амплитудные. Это достигается с помощью фазовоконтрастного конденсора и фазового объектива (рис. 16).

Рис. 16. Схема фазово-контрастного микроскопа (Стейниер Р. и др., 1979).

Фазовоконтрастный конденсор представляет собой обычный объектив с револьвером и набором кольцевых диафрагм для каждого объектива. Фазовый объектив снабжен фазовой пластинкой, которую получают нанесением солей редкоземельных элементов на объектив. Изображение кольцевой диафрагмы совпадает с кольцом фазовой пластинки соответствующего объектива.

Фазовоконтрастная микроскопия значительно повышает контрастность объекта и используется для изучения нативных препаратов.

Люминесцентная микроскопия основана на способности некоторых веществ под влиянием падающего на них света испускать лучи с другой (обычно большей) длиной волны (флюоресцировать). Такие вещества называют флюорохромами (акридиновый желтый, ФИТЦ, родамин и др.). Объект, обработанный флюорохромом, при освещении ультрафиолетовыми лучами приобретает яркий цвет в темном поле зрения.

Основной частью люминесцентного микроскопа является осветитель, имеющий лампу ультрафиолетового цвета и систему фильтров к нему (рис. 17). Очень важно использование нефлюоресцентного иммерсионного масла.

Рис. 17. Схематическое изображение флуоресцентного микроскопа: 1. Дуговая лампа; 2. Кварцевый коллектор; 3. Кювета, заполненная раствором сернокислой меди; 4. Передняя часть коллектора; 5. Ультрафиолетовый фильтр; 6. Призма; 7. Пластинка из уранового стекла; 8. Окулярный фильтр, поглощающий ультрафиолетовые лучи (Экспериментальная микробиология, 1965).

Люминесцентная микроскопия в практической микробиологии используется для индикации и идентификации возбудителей инфекционных заболеваний с помощью реакции иммунофлюоресценции.