ВИРУС КОРИ

ВИРУС НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ

Вирус ньюкаслской болезни высоко патогенен для кур, вызывая пневмонию и энцефалит у цыплят и респи­раторное заболевание у взрослых кур. Благодаря размно­жению в высоких титрах в куриных эмбрионах вирус широко используется как удобная лабораторная модель. У человека этот вирус вызывает конъюнктивит. Инфекция является профессиональной болезнью работников лабо­раторий и служащих птицефабрик, ухаживающих за заболевшими животными.

Заболевание длится 10—14 дней и сопровождается образованием антител, которые выявляются в РТГА, РСК и РН на куриных эмбрионах и в культуре клеток.

К роду Morbillivirus Относится вирус кори, а также вирусы чумы собак и рогатого скота. Впервые вирус был выделен в 1954 г. Дж. Эндерсом с соавт. и Пибсом в культуре клеток почек обезьян. Морфология вируса кори типична для парамиксовирусов. Диаметр вирионов 120—250 нм, спирали нуклеокапсида — 17 нм, шаг спирали — 4,5 нм. Вирус имеет липопротеидную оболочку, в которую встроены с наружной стороны гликопротеиды — гемагглютинин, F-белок. Отличием от других парамиксо­вирусов является отсутствие нейраминидазы. В составе вируса находятся шесть белков с молекулярными мас­сами от 37 • 10³ до 200 • 10³: помимо двух гликопро-теидов, белки нуклеокапсида Р и NP, РНК-полимераза (L-белок) и М-белок. Геном представлен однонитчатой «минус-нитевой» РНК.

Вирус содержит несколько антигенов. Антигены наружной оболочки могут быть отделены от антигенов сердцевины при разрушении очищенного вируса жиро-растворителями или детергентами. Вирус имеет общие антигенные детерминанты с вирусом чумы собак и рога­того скота. У людей, переболевших корью, появляются

антитела к указанным вирусам, и, наоборот, у животных после перенесенного заболевания появляются коревые антитела. С помощью моноклональных антител обнару­жено несколько серовариантов вируса кори.

Вирус чувствителен к эфиру и детергентам, быстро инактивируется при рН 2,0—4,0, при температуре 56° С инактивируется в течение 30 мин. В высохших каплях слизи при температуре 12—15° С он может сохраняться несколько дней.

Вирус обладает гемагглютинирующей, гемолитической и симпластообразующей активностью; агглютинирует эритроциты обезьян, но не агглютинирует эритроциты кур, морских свинок и других видов животных.

Из лабораторных животных к вирусу кори восприим­чивы только обезьяны, которые дают типичную клини­ческую картину коревой инфекции.

Наиболее чувствительными клеточными культурами являются первичные культуры почек обезьяны и эмбриона человека. Вирус может быть адаптирован и к клеткам почки собак, телят, клеткам амниона человека и к пере­виваемым культурам клеток человеческого (HeLa, KB, FL) и обезьяньего (Vero, MS, BSC1) происхождения. Он оказывает на клетки характерный цитопатический эффект с образованием гигантских многоядерных клеток-симпластов, включающих до 100 ядер, и синцитиев. В за­раженных клетках формируются включения — ацидофиль­ные в цитоплазме, базофильные в ядре. Цитоплазмати-ческие включения содержат помимо белков вирусного РНП, неструктурный белок С. Ядерные включения в ос­новном содержат белок С. В зараженных культурах появляется гемадсорбция.

Вирусы кори, выделенные в разных географических зонах, антигенно сходны.

Патогенез. Вирус проникает в верхние дыхательные пути и размножается в клетках эпителия слизистой оболочки, носоглотки, трахеи и бронхов. Он попадает в кровь и вызывает поражения эндотелия сосудов. В ре­зультате экссудации сыворотки в эндотелий капилляров эпидермиса и локального некроза клеток эндотелия появляется сыпь. В полости рта обнаруживаются пятна Коплика — Филатова — везикулы, образовавшиеся в результате некроза эндотелиальных клеток слизистой оболочки полости рта. Происходит генерализованная гиперплазия лимфоидной ткани, в лимфатических узлах, миндалинах, аденоидах, селезенке обнаруживаются много­

ядерные гигантские клетки. Они обнаруживаются в кож­ных поражениях и пятнах Коплика — Филатова.

Клиника. Инкубационный период составляет около 10 дней до момента повышения температуры и 14 дней до появления сыпи. В продромальном периоде инфекция напоминает острое респираторное заболевание и проте­кает с симптомами поражения верхних дыхательных путей (ринит, фарингит, конъюнктивит). Диагностическим приз­наком являются пятна Коплика — Филатова на слизистой оболочке щек. Сыпь папулезного характера сначала появляется на коже головы (в области лба и за ушами), а затем распространяется по всему туловищу и конеч­ностям. Температура держится 7—8 дней. Осложнением кори является пневмония, в раннем периоде заболевания отек гортани, круп. Редким осложнением (примерно 1 на 2000 случаев) является энцефаломиелит, который обычно возникает у детей старше 8—10 лет.

Иммунитет. После перенесенного заболевания остает­ся прочный (пожизненный) иммунитет. Вирус кори подав­ляет активность Т-лимфоцитов и вызывает ослабление защитных реакций организма.

Эпидемиология. Корь является эндемичной инфекцией. Определяющим фактором, обусловливающим распро­странение инфекции, является состояние коллективного иммунитета населения. Вспышки кори возникают при появлении прослойки восприимчивых детей. При попада­нии вируса в изолированные коллективы, где циркуляции вируса не было, корью заболевают люди всех возрастов. Классическим примером является занос кори на Фарер"» ские острова в 1846 г., когда корью переболело все население, кроме лиц пожилого возраста, заставших последнюю эпидемию кори. В подобных обстоятельствах корь протекает тяжело и смертность достигает 25%.

В основном вспышки .кори регистрируются в конце зимы и весной. Вирус выделяется главным образом в продромальном периоде при дыхании и кашле с каплями слизи.

Лабораторная диагностика. Обычно корь легко диагностируется по клинической картине и наличию пятен Коплика — Филатова, имеющихся примерно у 95% больных. Быстрая диагностика кори основана на обнаружении методом ИФ специфического антигена в клетках эпидермиса кожи при взятии соскоба из участка сыпи, диагностическим признаком является также обна­ружение специфического антигена и многоядерных

клеток в отделяемом носоглотки. Широко применяется метод обнаружения антител класса IgM в ИФА с исполь­зованием анти-IgM сыворотки. У 97% больных менее чем через 1 нед после начала заболевания обнаруживают IgM, которые сохраняются в течение 60 дней.

Выделение вируса из смывов носоглотки и крови возможно в продромальном периоде и в течение первых суток после появления сыпи. Для выделения вируса используют культуру клеток почек эмбриона человека и перевиваемые культуры L-41, Vero и клеток амниона человека (штамм FL). Культуры почек обезьян также чувствительны к вирусу кори, но реже применяются для выделения вируса в связи с возможной контаминацией обезьяньим кореподобным вирусом. Через 72—96 ч вирус кори вызывает в культуре клеток образование гигант­ских многоядерных клеток и синцитиев с цитоплазмати-ческими включениями, позже образуются внутриядерные включения, которые не содержат антиген и не флюорес­цируют. Включения гомогенны и окружены светлым ореолом. Идентификацию выделенного вируса проводят с помощью ИФ, РТГА, РН в культуре ткани. Антиген обнаруживают через 36—48 ч после заражения культуры ткани, сначала в околоядерной области цитоплазмы, затем в составе цитоплазматических включений, а потом диффузно распределяется во всей цитоплазме.

Серологическая диагностика проводится в РН в куль­туре клеток, РСК и РТГА. В клетках Нер-1, Нер-2, KB, амниона человека ставят РН, используя вирус, адапти­рованный к данной культуре и вызывающий в ней выра­женные цитопатические изменения. В РСК в качестве антигена применяют экстракт зараженных культур после трехкратного замораживания и оттаивания. РТГА ставят с 0,5% взвесью эритроцитов обезьян при комнатной температуре.

Все три реакции имеют одинаковую чувствительность.

Профилактика. Профилактика основана на иммуниза­ции живой вакциной, приготовленной из аттенуированных штаммов вируса.

В нашей стране для получения вакцины используют культуру клеток фибробластов эмбрионов японских перепелов. При охвате вакцинацией 90—95% детей резко снижается заболеваемость и прекращается цирку­ляция вируса.

Однако вакцинированные могут тоже заболеть корью в результате ряда причин: во-первых, в результате вакци­

нации вакциной, потерявшей иммуногенность; во-вторых, в результате отсутствия иммунитета (иммунитет форми­руется у 95—97% вакцинированных). Благодаря вакци­нации в ряде стран корь практически ликвидирована (например, в, Чехословакии).

В очагах кори детям до 2 лет и ослабленным детям старших возрастов вводят противокоревой иммуноглобу-лин.

Подострый склерозирующий панэнцефалит. Это медленная инфекция с летальным исходом, связанная с поражением ЦНС. Симптомами ее являются ступор, двигательные расстройства, слабоумие. О сходстве с возбудителем заболевания вируса кори свидетельство­вали противо коревые антитела в крови и цереброспиналь-ной жидкости, наличие в клетках мозга характерных включений, состоящих из скоплений вирусного рибо-нуклеопротеида, выявление специфического коревого антигена в ИФ. Окончательно установить этиологию этого заболевания удалось путем выделения вируса кори из мозга и лимфатических узлов погибших людей при сокультивировании с культурой клеток HeLa. Болезнь развивается в результате заноса вируса кори после перенесенной острой инфекции в клетки ЦНС; клетки являются непермиссивными для вируса и в них происхо­дит абортивный цикл репродукции, не сопровождающийся сборкой вирусной частицы. Отсутствие сборки обуслов­лено отсутствием синтеза М-белка или резким уменьше­нием его количества (у больных людей антитела к М-белку не обнаруживаются). Следствием этого является накопление и персистирование в зараженных клетках больших количеств рибонуклеопротеидов и постепенное разрушение клетки. Возможную роль в возникновении персистентной инфекции играет снижение клеточного иммунитета, приводящее к отсутствию распознавания Т-лимфоцитами клеток с антигенно измененной струк­турой поверхности.

РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНЫЙ ВИРУС (PC-ВИРУС)

Свое название вирус получил в результате специфи­ческого ЦПД в культуре клеток, ведущего к образованию симпластов и синцитиев. Этот вирус классифицируется как отдельный род (Pneumovirus), куда входят вирусы пневмонии мышей.

Сходны, но не идентичны с PC-вирусами человека PC-вирусы рогатого скота. Эти вирусы в естественных условиях поражают молодняк крупного рогатого скота, вызывая у них тяжелые респираторные заболевания, часто осложняющиеся пневмониями. Вирусы размножают­ся в культуре клеток почек эмбрионов крупного рогатого скота.

Первый штамм PC-вирусов был выделен в 1956 г. от шимпанзе с респираторным заболеванием и был назван «вирус насморка обезьян». Затем Р. Ченок с соавт. в 1957 г. выделили сходные штаммы от больных детей и показали, что вирус может вызывать респираторное заболевание у человека.

Вирус имеет сферическую форму, но отличается от других парамиксовирусов большей полиморфностыо, диаметр частиц в среднем 120—200 нм. На поверхности вириона имеются шипики большей длины, чем у других представителей семейства (12—16 нм), которые по форме напоминают бутылки. Нуклеокапсид имеет меньший диаметр, чем у других парамиксовирусов (10—13,5 нм). Шаг спирали — 6,5—7 нм.

Вирионы имеют плавучую плотность в хлориде цезия 1,23 г/см³. Геном имеет типичное для парамиксовирусов строение и представлен однонитчатой «минус-нитевой» РНК с молекулярной массой 5- 10⁶—5,6- 10⁶. В зара­женных клетках образуется 10 классов иРНК, кодирую­щих более 10 белков. Семь белков являются структурны­ми; в составе нуклеокапсида находятся белкиN, Р и L(вирусная РНК-полимераза), в составе липопротеидной оболочки два гликопротеида, G и F (белок слияния), а на внутренней поверхности оболочки белок М и белок К с молекулярной массой 22- 10³. Два белка с молекуляр­ной массой 11- 10³ и 14- 10³ являются неструктурными.

В отличие от других парамиксовирусов, у PC-вирусов не выявлено ни гемагтлютинина, ни нейраминидазы. Вирус исключительно лабилен и разрушается при замо­раживании и оттаивании, а также при обработке эфиром и детергентами. Он хорошо размножается в перевиваемых клеточных линиях HeLa, Hep-2, KB, BSC-1, FL и др. с образованием синцития, в ряде культур формирует бляшки.

Вирус патогенен для человека и обезьян. Наибольшую опасность вирус представляет для детей первых б мес жизни, у которых он вызывает тяжелые поражения нижних отделов дыхательных путей (бронхиты, бронхио-

литы, пневмонии). К 2 годам примерно у половины, а к 3 годам у э/4 детского населения появляются вирусней-трализующие антитела. Частота РС-вирусных инфекций среди острых респираторных заболеваний колеблется от 3 до 16%. Вспышки инфекции возникают в осенне-зимний период. Известны 2 серотипа вируса.

Вирус попадает в организм воздушно-капельным путем. Инкубационный период 3—5 дней. Размножение происходит в эпителиальных клетках слизистой оболочки дыхательных путей, и патологический процесс быстро распространяется на нижние дыхательные пути. У пере­болевших появляются антитела в сыворотке и отделяемом слизистой оболочки носа, представленные иммуноглобулинами класса А. Секреторные антитела являются важным фактором иммунитета при РС-инфекции.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследо­вания является отделяемое носоглотки, которое берут сухими марлевыми тампонами с задней стенки глотки. У погибших детей исследуют ткань легких, трахеи и бронхов. Материал не замораживают в связи с высокой лабильностью вируса и используют как можно раньше

после взятия.

Быстрая диагностика заболевания заключается в выявлении специфического антигена в отделяемом носо­глотки с помощью ИФ. У детей, погибших от пневмонии или бронхиолита, в эпителии слизистой оболочки бронхов обнаруживаются многоядерные клетки и синцитий. Спе­цифический антиген выявляют в цитоплазме эпителия Слизистой оболочки носоглотки в первые 2 дня после заболевания и в течение 1—1,5 нед болезни. В период вспышек положительная ИФ наблюдается более чем

в 50% случаев.

Вирус выделяют в культурах клеток HeLa, Hep-2, KB, FL, в первичных и перевиваемых клетках почек эмбриона человека и морских свинок. Через 24—48 ч после заражения появляются гигантские многоядерные клетки и синцитий, содержащие цитоплазматические включения, через 4—5 дней клетки полностью разрушают­ся. Вирус выделяют за сутки до появления симптомов заболевания и в течение 10—14 дней в период болезни.

Для идентификации вируса используют ИФ, РН в культуре клеток и РСК.

Серологическая диагностика проводится в РСК и РН в культуре клеток. Более чувствительной является РН, что позволяет диагностировать РС-инфекцию в 70—80%

случаев. Однако у детей первых б мес жизни имеются материнские антитела в титре до 1:320, и поэтому прирост антител у них может не обнаруживаться. Поэтому у таких детей диагностика основана на обнару­жении специфического антигена в эпителии слизистой оболочки носоглотки с помощью ИФ и ИФА. Специфическая профилактика не проводится.

ГЛАВА 11. СЕМЕЙСТВО ОРТОМИКСОВИРУСОВ (ORTHOMYXOVIRIDAE)

Название происходит от греч. orthos — правильный и туха — слизь и было предложено для этого семейства в связи с сродством его представителей к муцину. К миксовирусам были отнесены вирусы гриппа, кори, паро­тита, парагриппа, респираторно-синцитиальный вирус, которые позже были выделены в отдельное семейство парамиксовирусов.

КЛАССИФИКАЦИЯ ВИРУСОВ ГРИППА

Все представители семейства ортомиксовирусов яв­ляются вирусами гриппа. Они классифицируются на вирусы гриппа типов А, В и С по антигену РНП, который не дает перекрестных межтипрвых серологических реакций. Характерной особенностью вирусов гриппа типа А является изменение антигенных свойств обоих поверхностных белков (гликопротеидов) гемагглютинина и нейраминидазы. Многочисленные антигенные варианты вирусов гриппа с различными Типами гемагглютинина и нейраминидазы выделяют от домашних и диких живот­ных. Наличие различных антигенных вариантов потребо­вало унифицированной классификации вирусов на основе антигенных свойств гемагглютинина и нейраминидазы.

С 1980 г. по предложению ВОЗ введена новая классифи­кация вирусов гриппа типа А, основанная на обозначении антигенного подтипа гемагглютинина и нейраминидазы. Гемагглютинирующие антигены всех штаммов вируса гриппа сгруппированы в 13 подтипов HI — Н13, а ней-раминидазные антигены — в 10 подтипов N1—N10.

У вируса гриппа типа В, хотя и существуют антигенные варианты, однако их не так много и они не нуждаются в классификации. В отличие от вирусов типаА, циркули­рующих как у людей, так и у животных, вирусы гриппа типа В выделены только от человека.

По рекомендации ВОЗ система номенклатуры вирусов гриппа состоит из 2 частей: обозначение штаммов и опи­сание антигенов гемагглютинина и нейраминидазы. Обозначение штаммов включает: 1) тип (А, В и С);

2) естественный хозяин, если это не человек; 3) геогра­фическое происхождение штамма; 4) порядковый номер штамма; 5) год выделения штамма. Описание антигенов НА и NA для вируса типа А следует за обозначением штамма и заключается в круглые скобки, например А/утка/СССР/695/76 (H3N2).

Типовым представителем ортомиксовирусов является вирус гриппа типа А.