РЕПАРАЦИЯ ДНК.

РЕПЛИКАЦИЯ ДНК.

А.Корнберг (с 1955г - поиск фермента, синтезирующего ДНК) - ДНК-полимераза I, 500 мг чистого фермента получены из 100 кг E.coli. Условия работы фермента: все нуклеотиды, затравка ДНК, матричная ДНК. Катализ идет в напралении 5`- 3`, обладает также нуклеазной активностью. Синтез ДНК in vitro. Высокая репаративная активность.

1967 год ознаменовался открытием ДНК-лигазы - образование фосфоэфирной связи между 2 цепями. Фермент активен при наличии свободной OH-группы на 3`-конце одной цепи и фосфатной группы на 5`-конце другой, необходима затрата АТФ. Цепи ДНК, соединяемые ДНК-лигазой, должны быть двухцепочными.

В 1969 г. Лусия и Кэрнс выделили мутантную форму E.coli, где только 0,5-1% нормальной полимерной активной ДНК-п-I, размножение хорошее, но быстрая гибель при УФ-облучении (вывод - репарация ДНК нарушена в мутантной форме. Выделены ДНК-п-II, III.

Синтез новой ДНК осуществляется одновременным раскручиванием родительской ДНК. Участок ДНК при этом называется репликационной волной. Начинается в определенном месте, идет в обоих направлениях с примерно одинаковой скоростью.

Одна цепь (дочерняя) синтезируется непрерывно (ведущая), а вторая прерывисто в виде коротких фрагментов (отстающая цепь) Оказаки (до 1000 нуклеотидов), сшивают фрагменты ДНК-лигазой. Образуются несколько репликационных включений через 3-7 тыс. пар нуклеотидов.

Затравкой для синтеза ДНК служит РНК. Фермент РНК-полимераза (праймаза) синтезирует короткую цепь из 10 нуклеотидов РНК, для этого фермента не нужна затравка для синтеза полинуклеотида. Синтез ДНК можно ингибировать рифамицином (ингибитор биосинтеза РНК).

В процессе репликации участвует большое количество белков (не менее 15), которые участвуют в поиске начала репликации, сплетении, расплетении, стабилизации одноцепочных участков, инициировании работы РНК-полимеразы. Механизм репликации столь сложен, чтобы избежать ошибки, постоянно идут возвраты правильности включения нуклеотидов, редактированию (частота ошибок не более 1 на 109-1010 пар.

Основания могут теряться, изменяться, разрывы внутрицепочные, поперечные сшивки (ионизирующая радиация, УФО, химические вещества). Многие повреждения можно исправить, так как есть двойная информация (2 спирали). Участвуют или ДНК-п-I или эндонкклеаза, ДНК-п-I и ДНК-лигаза. Пример: образование пиримидинового димера (тимидиновый) при действии на ДНК УФО. Сочетание Т-Т в одной цепи образует сшивку:

Золотистая ксеродерма - заболевание кожи у людей (чувствительность кожи к солнечному свету и УФО). Кожа становится сухой, дерма атрофируется, веки - рубцы, поражения роговицы, во многих местах - рак кожи (гибель до 30 лет). Причина - низкая активность эндонуклеазы, которая гидролизует остов ДНК вблизи пиримидиновых димеров.