Общие сведения о методах и испытаниях ЛС на токсичность, стерильность и микробиологическую чистоту

Доклинические испытания ЛС. Исследования БАВ принято условно подразделять на:

1. Фармакологические исследования проводятся на моделях соответствующих заболеваний или патологических состояний с применением однократно вводимых, постоянно возрастающих доз веществ в целях поиска необходимого эффекта. Например, при исследовании новых антиаритмических препаратов класса амидов у животных вызывают искусственную аритмию. ЛВ считается обладающим специфической (антиаритмической) активностью, если способствует снятию данной патологии.

2. При токсикологических исследованиях ЛС устанавливают характер и выраженность возможного повреждающего воздействия на организм экспериментальных животных. При этом получают информацию о том, какие органы и ткани наиболее чувствительны к ЛС. Проводят исследования в лабораторных условиях и строго регламентируются нормативными документами, в которых определяется схема и порядок проведения опытов, условия содержания и рацион кормления животных, их число, способы введения препаратов, описание состояния животных и т.д.

Определение острой токсичности – устанавливают зависимость доли погибших животных (%) от дозы испытываемого вещества. По экспериментальной кривой «доза—ответ» определяют показатели: ЛД₁₀ (доза, при которой гибнет 10% подопытных животных) и ЛД₅₀ (доза, при которой гибнет 50% подопытных животных). Исследования проводят на различных видах подопытных животных и рассчитывают коэффициент видовой чувствительности. Если значение коэффициента близко к 1, то видовая чувствительность отсутствует. Токсикологические характеристики позволяют оценить границы безопасности ЛС (т.е. широту терапевтического действия), которая находится в диапазоне от минимальной эффективной до минимальной токсической дозы.

Определение хронической токсичности проводят при ежедневном введении ЛС в течение определенного времени в трех дозах: близкой к терапевтической; предполагаемой терапевтической и максимальной терапевтической. В течение эксперимента снимают следующие показатели: объем потребления животными корма и воды; динамику изменения массы тела, изменение общего состояния и поведения; гематологические и биохимические показатели и др.

После завершения эксперимента по определению острой и хронической токсичности проводят патоморфологические и гистологические исследования внутренних органов, мозга, костей, глаз подопытных животных.

Далее устанавливают специфическую токсичность испытываемого вещества: его канцерогенное, мутагенное, аллергизирующее, иммунотоксическое действие; эмбриотоксичность; гонадотоксичность и т.д. После проверки составляется протокол, который включает параметры эксперимента и заключение о токсичности испытываемого вещества.

Клинические испытания ЛВ включают систематическое изучение исследуемого препарата на животных в целях проверки его лечебного действия или выявления нежелательной реакции, а также изучение всасывания, распределения, метаболизма и выведения из организма для определения его эффективности и безопасности. Для проведения этих испытаний заводом-изготовителем вырабатывается определенное количество препарата, контролируется его качество, фасуется, маркируется (указывается «Для клинических испытаний») и направляется на испытание. Первый этап осуществляется на 30—50 животных. Следующий этап — расширенные испытания на базе 2—5 клиник с привлечением большого числа больных. При этом заполняются индивидуальные карты больных с подробным описанием результатов различных исследований (анализ крови, мочи, УЗИ).

Микробиологический контроль в процессе производства ЛВ. Загрязнение микроорганизмами может происходить на разных стадиях производства. Поэтому испытания на микробиологическую чистоту осуществляются на всех стадиях получения ЛС. Основными источниками микробной контаминации являются сырье, вода, оборудование, воздух производственных помещений, упаковка готовой продукции, персонал. Для количественного определения содержания микроорганизмов в воздухе используются различные методы отбора проб: фильтрация, осаждение в жидкостях, осаждение на твердые среды. Для оценки микробиологической чистоты проводят испытания на стерильность. Испытанию подвергаются ЛС, обладающие выраженным антибактериальным действием, бактериостатическими свойствами и содержащие консерванты. Используют метод мембранной фильтрации, основанной на пропускании ЛС через полимерную мембрану. При этом микроорганизмы остаются на поверхности мембраны. Далее мембрану помещают в соответствующую питательную среду и наблюдают образование колоний при инкубировании. Для подсчета жизнеспособных микроорганизмов обычно используют мембраны из эфиров целлюлозы с размером пор 0,45 мкм.

Испытания на пирогенность инъекционных препаратов. Необходимость проведения этого теста связана с присутствием в инъекционных препаратах фрагментов клеток грамположительных и грамотрицательных бактерий, грибов, вирусов и эндотоксинов. Применение таких препаратов вызывает жар, озноб, тошноту, летальный исход. Наибольшую опасность представляют эндотоксины, которые являются термостабильными и состоят из липополисахаридов внешней плазматической мембраны грамотрицательных бактерий, попадание которых в организм провоцирует резкий воспалительный процесс. Поэтому содержание пирогенных примесей в инъекционных растворах должно быть сведено к минимуму. Контроль проводят в опытах in vivo на кроликах (ГФXI), основанный на измерении их температуры тела после введения в ушную вену испытуемых стерильных жидкостей.

Испытуемые жидкости считают непирогенными, если сумма повышений температуры у всех трех кроликов не превышает 1,4 ºС. Если сумма температур превышает 2,2°С, то жидкость считают пирогенной, если меньше 2,2°С, то дальнейшее испытание проводят уже на восьми кроликах. Жидкость считают непирогенной, если сумма повышения температур у всех кроликов не более 3,7 ºС.

В последнее время для определения пирогенности испытывают различные физические и физико-химические методы, например спектрофотометрию, полярографию и др.

На содержание веществ гистаминоподобного действия испытывают парентеральные лекарственные средства на взрослых кошках. Методика испытания подробно описана в НТД.