Методические рекомендации по подготовке к занятию
Тема 5 Основные стадии эмбрионального развития
Ферменты
Щелочная фосфатаза в клетках канальцев первичной почки плода свиньи
Кальций-кобальтовый метод Гомори
Гистохимическое исследование ферментов основано на использовании в реакции субстрата, иначе говоря, инкубационной среды. Инкубация вызывает расщепление субстрата и выпадение осадка, который дополнительными химическими реакциями переводится в окрашенное соединение, видимое под микроскопом.
Интенсивность окраски и ее распространение дают возможность судить об активности и топографии фермента в клетках и тканях.
Литература:6, с.28-29;
Контрольные вопросы:
1 Какой краситель используется в качестве ядерного красителя?
2 Фиксация смесью Карнуа?
3 Для чего используют метод Браше?
Цель:
- ознакомить с основными стадиями эмбрионального развития
План:
1Работа с микроскопом
2 Рассмотреть пстоянные препараты
Дробящиеся яйца морского ежа добывают с морским планктоном и отбирают под лупой. Материал можно окрашивать кармином или гематоксилином, но можно рассматривать и без окраски, изготовляя тотальные препараты в бальзаме. Дробление у морского ежа на первых стадиях идет сходно с дроблением яиц ланцетника. Ввиду значительной трудности получения дробящихся яиц ланцетника можно заменить их дробящимися яйцами морского ежа.
При слабом увеличении на препарате видны различные стадии дробления. Сначала надо постараться найти нераздробившееся (неоплодотворенное) яйцо. В нем легко различить цитоплазму и пузырьковидное ядро, в котором заметно темное ядрышко. Затем нужно отыскать стадию двух бластомеров; у них в центре часто виден силуэт
митотической фигуры, показывающий подготовку бластомеров к следующему делению. Можно найти и стадию разделения двух бластомеров, когда каждый из них делится поперечной перетяжкой, и, наконец, надо найти стадию четырех бластомеров, в каждом из которых виден силуэт ядра. Общий объем четырехбластомерной стадии не превышает объема нераздробившегося яйца.
Далее нужно отыскать стадию восьми бластомеров, когда бластомеры расположены в два ряда по четыре бластомера в каждом. Можно встретить стадию морулы. Каждую стадию нужно отыскивать при слабом увеличении, но зарисовку делать при сильном увеличении, помня при этом, что дело идет о толстом тотальном препарате, требующем особенно бережного движения микрометрическим винтом, так как иначе препарат легко может быть раздавлен. Признаком полного дробления у рассматриваемого объекта является полное разделение зиготы на бластомеры; признаком равномерного дробления — одинаковая величина получающихся бластомеров на ранних стадиях развития.
Литература 6, с 58-59
Контрольные вопросы:
1 Что такое дробление яиц?
2 Перечислите стадии дробления яйца?