Методические рекомендации по подготовке к занятию
Тема 4 Клеточные включения. Нуклеиновые кислоты. Ферменты
Цель:
- ознакомить с клеточными включениями, нуклеиновыми кислотами и ферментами
План:
1 Расмотреть под микроскопомпрепарат печени хвостатых амфибий
2 Расмотреть и зарисовать клеточные включения, клеточные границы, клеточные ядра
Чтобы сохранить жир на срезах, полученных от залитых в целлоидин или парафин объектов, необходимо применить фиксатор, в состав которого входит осмиевая кислота, фиксирующая жир и переводящая его в нерастворимое для последующих реактивов состояние; в то же время она окрашивает жир в черный цвет. После осмиевых фиксаторов обычная окраска ядер гематоксилином не удается, поэтому в качестве ядерного красителя применен сафранин, окрашивающий ядра в красный цвет.
Снова под микроскопом знакомый объект — печень хвостатых амфибий, но на этот раз препарат обработан специальным образом для сохранения жировых включений в печеночных клетках. Рассматривая препарат при слабом увеличении, легко заметить в печеночных клетках черные шарики, представляющие собой окрашенные осмием липидные включения.
Нужно выбрать место, где включения видны вполне отчетливо, хорошо заметны клеточные границы и окрасились клеточные ядра; рассмотреть и зарисовать препарат следует при сильном увеличении.
Клеточные границы при примененной здесь фиксации не так заметны, как на препаратах или но все же видны достаточно ясно.
Ядра печеночных клеток — гепатоцитов как обычно, круглые, окрашены сафранином в красный цвет и, как это типично для осмированных препаратов, имеют более гомогенный вид, чем при других фиксациях; только местами в них заметны крупные хроматиновые глыбки.
Цитоплазма гепатоцитов окрашена в бледный желтовато-зеленый цвет. В цитоплазме видны липидные включения в виде шариков различной величины, разбросанных по всей клетке и окрашенных в темный (от бурого до черного) цвет. Между печеночными клетками видны пигментные клетки.
Рибонуклеиновая кислота (РНК) в клетках печени лягушки
Фиксация смесью Карнуа; окраска: метиловый зеленый и пиронин
Здесь перед нами тот же объект, как и на препарате , но при другой фиксации и окраске, которые позволяют выделить как структуры, содержащие ДНК, так и части клеток, содержащие РНК- Элементы, содержащие ДНК, окрашиваются в синевато-зеленый цвет метиловым зеленым, а части клетки, содержащие РНК, окрашиваются в красный цвет пиронином. Изучить и зарисовать препарат следует при сильном увеличении.
Цитоплазма окрашена в красный цвет; ее неравномерная окраска указывает, что РНК больше в различных зернистых образованиях цитоплазмы. В круглых ядрах выделяются синевато-зеленые глыбки хроматина и хорошо заметно ядрышко, окрашенное в красный цвет. Эта окраска показывает, что РНК имеется не только в цитоплазме, но и в ядрышках. Проверкой заключения в местонахождении РНК в клетке служит метод Браше; срезы до окраски подвергают действию рибонуклеазы— фермента, разрущающего РНК. Если способные окрашиваться в красный цвет части клетки перестают окрашиваться после действия рибонуклеазы, это служит подтверждением наличия в таких структурах РНК.