Феномен гемадсорбции (РГадс)

ФЕНОМЕНЫ, ПОЗВОЛЯЮЩИЕ ВЫЯВИТЬ ВИРУС В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК

Выделение вирусов и методы их индикации в культуре клеток

Питательные среды и солевые растворы для культур

- Буферные солевые растворы применяются для промывки тканей и клеток в процессе приготовления клеточных культур и для приготовления питательных сред.

- Питательные среды по своему назначению делятся на ростовые и поддерживающие.

Широкое применение находят синтетические стандартные питательные среды, например, синтетическая среда 199 и среда Игла. Независимо от назначе­ния все питательные среды для культур клеток конструируются на основе сбалансированного солевого раствора. Чаще всего им является раствор Хенкса. В состав ростовых сред входит сыворотка крови животных.

Для заражения используются чувствительные к данному вирусу культуры с хорошо развитым монослоем клеток, находящиеся в пробирках (флаконах).

Перед заражением клеток питательную среду удаляют и в каждую пробирку (лунку планшета или флакон) вносят по 0,1-0,2мл взвеси испытуемого материала, предварительно обработанного антибиотиками. После 30 - 60 мин. контакта вируса с клетками удаляют избыток материала, вносят по 1,0 - 1,5мл на пробирку поддерживающей среды и оставляют в термостате до выявления признаков репродукции вирусов.

1. Цитопатический эффект (действие) – (ЦПЭ или ЦПД), который является следствием поражения клеток под действием размножающегося в них вируса.

ЦПД может быть трех основных типов:

а) кругло- или мелкоклеточная дегенерация;

б) образование гигантских многоядерных клеток - симпластообразование;

в) образование внутриядерных или цитоплазматических включений вирусспецифических или неспецифических.

Принцип метода: контакт клеток с эритроцитами приводит к адсорбции эритроцитов на поверхности клеток, пораженных вирусом с гемагглютинирующими свойствами. Эффект можно увидеть при малом увеличении микроскопа (х80).
положительная	отрицательная