Техника взятия крови для серологических реакций на сифилис
Выявление возбудителя
Методы диагностики сифилиса
Дополнительный материал к занятию
Для обнаружения возбудителя в материале из сифилидов, полученном из пораженных участков наружных половых органов, заднего прохода, кожи и слизистой оболочки полости рта, а также инфицированных лимфатических узлов, применяют:
1) микроскопию в тёмном поле;
2) реакцию прямой иммунофлюоресценции (для образцов из поражений в полости рта или из других очагов, где возможна контаминация трепонемами-комменсалами);
3) полимеразную цепную реакцию (ПЦР).
Серологические тесты на сифилис подразделяются на:
а)нетрепонемные тесты:реакция микропреципитации с кардиоли-
пиновым антигеном (РМП), тест ВДРЛ (VDRL - Venerеal Disease Research Laboratory), тест быстрых плазменных реагинов (РПР) и их варианты.
б)трепонемные тесты:реакция пассивной гемагглютинации (РПГА), реакция иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноферментный анна-
лиз (ИФА), реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ), иммуноблоттинг (Western blot).
в)специфические тесты для определения антител класса IgM к T.pallidum:19S IgM-РИФ-абс., ИФА и иммуноблоттинг для определения IgM-антител к T. pallidum.
Дляскрининговых (отборочных)обследований населения на си-
филис следует использовать:
1) реакцию микропреципитации (РМП) или РПР/ВДРЛ в сочетании с РПГА;
2) ИФА на IgG или суммарные трепонемоспецифические иммуног-
лобулины;
3)РИФ-абс. или IgM-ИФА при подозрении на первичный сифилис.
В случае если какой-либо из скрининговых тестов окажется положи-
тельным, используют любой из специфическихподтверждающихтрепонемных тестов:
1) РПГА, ИФА, РИФабс (или другой трепонемный тест, например, РПГА, если ИФА используется как скрининговый метод; ИФА, если в ка-
честве скринингового используется РПГА);
2) иммуноблоттинг на IgG к T.pallidum, если подозреваются ложно-
положительные результаты РПГА или РИФ.
Для контроля эффективности леченияиспользуют РМП, РПР или ВДРЛ в количественном варианте.
Кровь для исследования на РСК, РИФ и РИТ берут из локтевой вены натощак шприцем или одной иглой (самотёком). Шприц и игла должны быть после стерилизации промыты изотоническим раствором натрия хло-
рида (нельзя промывать водой, спиртом, кислотами, щелочами). В чистую сухую пробирку забирают 5–7 мл крови. Кровь для исследования экспресс-методом берут из пальца или из локтевой вены.
При необходимости для исследования в отдалённых лабораториях можно вместо крови пересылать сухие сыворотки. Для этого на следующий день после взятия крови сыворотку отделяют от сгустка. Затем набирают 1 мл сыворотки в шприц и выливают её в виде двух отдельных кружков на полоску писчей бумаги, вощаной бумаги или целлофана. На полоске бумаги с высушенной при комнатной температуре сывороткой надписываются фамилия, имя, отчество больного, возраст, дата взятия крови. Бумага свёртывается в виде аптечного пакетика для порошка. Пакетики вкладываются в конверт вместе с сопроводительным списком фамилий и указанием предполагаемого диагноза. Конверт немедленно отправляется почтой или нарочным в ближайшую серологическую лабораторию, занимающуюся серодиагностикой сифилиса. Срок годности сыворотки для южных окраин России не более 5 дней, для остальной части – 10 дней.
О способе взятия капель крови на бумагу
для агглютинации при лептоспирозе
Кровь из пальца в количестве 10-15 капель берут на полоску фильтровальной бумаги, высушивают при комнатной температуре и по почте отправляют в лабораторию. В лаборатории высушенные на бумаге капли крови вырезают, измельчают, заливают физиологическим раствором в отношении 1:10 с последующим разведением до титра. Высушенная кровь сохраняет антитела не менее месяца.
Контрольные вопросы
Возбудитель сибирской язвы: название по-латыни, морфология, расположение, споры, жгутики, капсула, окраска по Граму. Какими способами можно простерилизовать материал, заражённый сибиреязвенной палочкой? На каких средах культивируется, характер роста на плотной среде и в жидкой среде, отношение к желатину? Какие антигены содержит, какой из антигенов участвует в реакции Асколи; факторы вирулентности. Сибирская язва у человека: название по-латыни, источник инфекции, пути проникновения возбудителя в организм, перечислите клинические формы, наблюдается ли бактериемия. Микробиологический диагноз сибирской язвы; перечислите методы исследования, материалы для исследования. Что можно видеть при микроскопии мазка из исследуемого материала, какое значение имеет микроскопический метод? Выделение чистой культуры: ход исследования и результаты, отличие сибиреязвенных бацилл от непатогенных бацилл, какая диагностическая проба ставится на больном? Реакция Асколи: что это за реакция, что обнаруживают с помощью этой реакции, что служит исследуемым материалом; что является диагностическим препаратом, что он содержит, техника постановки. Препараты для специфической профилактики и терапии чумы, туляремии, бруцеллёза; работы отечественных ученых. Общая характеристика спирохет. Классификация спирохет: перечислите (по-латыни) названия родов, видов спирохет и заболевания, которые они вызывают. Возбудители лептоспирозов: название по-латыни рода и вида патогенных лептоспир, варианты лептоспир, циркулирующих в нашей стране; морфология лептоспир, характер движения, отношение к окраске, среды для культивирования, температурный оптимум роста. Источники и пути заражения человека. Микробиологическая диагностика: материалы для исследования, методы исследования в зависимости от сроков заболевания; особенности бактериоскопических, бактериологических исследований, серологическая диагностика. Препараты для диагностики, активной и пассивной профилактики, препараты для лечения. Какие возвратные тифы вы знаете (в зависимости от переносчика и ареала распространения)? Источники и механизм заражения. Возбудитель эпидемического возвратного тифа: морфология и физиология, отношение к окраске. Патогенез лихорадочных приступов: где находятся боррелии во время приступа; почему прекращается приступ; где сохраняется возбудитель в межприступный период; причины возникновения последующих приступов. Возбудители эндемического возвратного тифа: название по-латыни, морфология и физиология, переносчик. Микробиологическая диагностика возвратных тифов: материал для исследования, когда его нужно взять, что обнаруживают и каким способом? Препараты для лечения. Возбудитель болезни Лайма: название по-латыни, морфология и физиология, отношение к окраске. Источники и пути передачи, переносчик. Клинические проявления. Микробиологическая диагностика: материалы для исследования в разные периоды болезни, обнаружение возбудителя, серологическая диагностика. Препараты для лечения. Возбудитель сифилиса: название по-латыни, к какой группе микроорганизмов относится? Морфология, характер движения, отношение к окраске, чем оно объясняется? Отличие бледной трепонемы от сапрофитических трепонем; способы окраски препаратов; морфология трепонем в окрашенных препаратах. Способ биологического окисления, среды для культивирования; «культуральные» и «тканевые» трепонемы, различие между ними; отношение к температуре, высушиванию, дезинфицирующим веществам. Заболевание у человека: источник инфекции, входные ворота, пути заражения. Иммунитет при сифилисе, его особенности, проявления. Методы прямого выявление возбудителя сифилиса: материалы для исследования, способы обнаружения возбудителя. Серодиагностика сифилиса: в какие периоды заболевания проводится; какие серологические реакции применяются для диагностики сифилиса? Какие реакции применяются в качестве скрининговых и подтверждающих тестов? Какие тесты применяются для контроля эффективности лечения? Как забирается и пересылается материал для серодиагностики сифилиса. Препараты для диагностики и лечения сифилиса.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Напишите по-латыни названия возбудителей сифилиса, лептоспироза, эпидемического и эндемического возвратных тифов, болезни Лайма.
Работа студента на практическом занятии
1. Окончание микробиологической диагностики сибирской язвы. Изучите колонии на чашках с посевом отделяемого сибиреязвенного карбункула, приготовьте мазки, окрасьте, промикроскопируйте. Результаты изучения колоний и микроскопии опишите в журнале.
2. Изучение препаратов для диагностики и специфической профилактики чумы, туляремии, бруцеллеза, сибирской язвы, лептоспирозов. Познакомьтесь с набором препаратов и дайте характеристику каждого из них по известной вам схеме.
3. Ознакомление с микробиологической диагностикой лептоспирозов. Изучите схему микроскопической диагностики лептоспироза, промикроскопируйте культуру лептоспир в микроскопе с тёмным полем зрения.
4. Ознакомление с микробиологической диагностикой возвратных тарифов и болезни Лайма. Изучите схемы диагностики возвратных тифов и болезни Лайма. Промикроскопируйте и зарисуйте мазок из крови больного возвратным тифом, окрашенный по Романовскому-Гимза.
5. Изучение морфологии возбудителя сифилиса. Промикроскопируйте и зарисуйте мазок из отделяемого сифилитической язвы, окрашенный по Романовскому–Гимза.
6. Серологический диагноз сифилиса. Разберите методы, используемые для серологической диагностики сифилиса.
7. Ознакомление с методом пересылки высушенного препарата сыворотки для диагностики сифилиса. Повторите устно методику взятия и высушивания сыворотки для серологических реакций. Познакомьтесь с готовым препаратом для пересылки сыворотки.