План изучения темы
Исходный уровень знаний
Занятие 2
Ознакомление с правилами работы в микробиологической лаборатории.
2. Усвоение таксономического положения микробов. Начертите в тетради таблицу «Место микробов среди других живых существ».
3. Приготовление и окраска препаратов из бактериальных культур. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем техники приготовления и окраски препаратов. Приготовьте мазки-препараты из культур стафилококка и кишечной палочки; окрасьте простым способом – водным фуксином и метиленовым синим. Ознакомьтесь с наиболее употребительными красителями, применяемыми в микробиологической практике.
4. Микроскопирование и зарисовка окрашенных мазков-препаратов различных форм бактерий. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем техники микроскопии; самостоятельно промикроскопируйте и зарисуйте мазки–препараты различных форм бактерий: круглые (стафилококк, сарцина, стрептококк), палочковидные бактерии (стрептобацилла), извитые (вибрион).
5. Изучение методов тёмнопольной, фазово-контрастной и люминесцентной микроскопии. Повторите устно принципы микроскопии, ознакомьтесь с люминесцентной тёмнопольной и фазово-контрастной микроскопией.
СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ
При микробиологической диагностике многих болезней приходится применять сложные методы окраски не только специалистам - микробиологам, но и лечащим врачам, в особенности в экстренных случаях. Для того чтобы правильно выбрать подходящий для каждого случая способ окраски и правильно оценить полученные результаты необходимо не только научиться окрашивать препараты, но и хорошо продумать и понять принципы сложных методов окраски. На практике наиболее часто применяют способы окраски по Граму в модификации Синёва и по Цилю-Нильсену.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать принцип и технику сложных методов окраски.
Для усвоения материала темы необходимо вспомнить основные формы бактерий и этапы приготовления мазков-препаратов.
Цель занятия
1. Усвоить, что сложные методы окраски служат для дифференциации микробов между собой
2. Освоить метод окраски бактерий по Граму в модификации Синёва и по Цилю-Нильсену.
3. Найти различия в структуре и химическом составе грамположительных и грамотрицательных бактерий.
4. Ознакомиться с основными методами сложной окраски, применяемыми для выявления структурных элементов бактерий.
1. Понятие о сложных методах окраски.
2. Принцип и техника окраски по Граму в модификации Синёва.
3. Принцип и техника окраски по Цилю-Нильсену.
4. Методы окраски: по Ожешко, по Бурри–Гинсу, по Нейссеру.
После изучения темы студент должен уметь
1. Готовить фиксированные препараты из культур микроорганизмов, растущих на плотных питательных средах.
2. Окрашивать препараты методами Грама (в модификации Синёва) и Циля-Нильсена.
3. Дифференцировать микроорганизмы по морфологическим, тинкториальным свойствам и интерпретировать полученные результаты.
Контрольные вопросы
Кто и когда впервые увидел и описал микроорганизмы? Назовите основные этапы развития микробиологии. Назовите фамилии учёных, с работами которых связано начало развития первых трёх этапов. Назовите фамилию первого микробиолога («охотника за микробами») в России. Назовите фамилию учёного, впервые разработавшего метод предохранительных прививок против оспы. Луи Пастер: назовите его основные открытия в области микробиологии; какой метод предложен им для предупреждения нагноений ран? Какие вакцины им получены? Роберт Кох: основные его открытия в области микробиологической техники и возбудителей болезни. И.И. Мечников: основные открытия в области иммунологии. Назовите фамилии выдающихся русских учёных-микробиологов и иммунологов: первооткрыватель вирусов; основатель первой в России школы микробиологов; учёный, впервые в России получивший пенициллин; иммунолог, автор вирусо–генетической теории происхождения злокачественных опухолей.
Для чего нужны сложные методы окраски? Назовите методы окраски, позволяющие: дифференцировать бактерии на две группы по структуре клеточной стенки; выявлять кислотоустойчивые микробы; выявлять споры; выявлять зёрна волютина; выявлять капсулы. Как производится окраска по Граму в модификации Синёва? Сущность окраски по Граму в модификации Синёва: в какой цвет окрашиваются грамположительные бактерии? Почему? В какой цвет окрашиваются грамотрицательные бактерии? Почему? От чего зависит различное отношение бактерий к окраске по Граму? Отношение бактерий к окраске по Граму в модификации Синёва: кокков, спорообразующих палочек, неспорообразующих палочек, извитых форм (перечислить исключения из правил). Техника окраски по Цилю-Нильсену. Принцип окраски: в какой цвет окрашиваются кислотоустойчивые бактерии, в какой – кислотоподатливые и почему? Какова основная особенность клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий?
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Напишите в тетради этапы окраски по Граму в модификации Синёва и по Цилю-Нильсену.
Работа студента на практическом занятии
1. Освоение метода окраски по Граму в модификации Синёва. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем техники окраски по Граму. Поставьте опыт окраски по Граму.
Цель опыта: определить, имеет ли метод Грама преимущество перед простым методом и в чём оно состоит; определить, в каких случаях целесообразно применение метода окраски по Граму.
Материал: стафилококки (грамположительные бактерии) и кишечные палочки (грамотрицательные бактерии).
Ход опыта: приготовить два одинаковых мазка из смеси стафилококков и кишечных палочек; окрасить один мазок водным фуксином, другой – по Граму в модификации Синёва. Микроскопировать.
Результат: два рисунка и описание их.
Вывод: (выводы содержат ответы на вопросы, поставленные в цели опыта).
Составьте схему окраски по Граму (поэтапно). Начертите таблицу «Отношение бактерий к окраске по Граму».
2. Освоение метода окраски по Цилю-Нильсену. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем техники окраски по Цилю-Нильсену. Поставьте опыт окраски по Цилю-Нильсену.
Цель опыта: определить, имеет ли метод Циля-Нильсена преимущества перед простым методом окраски и в чём оно состоит; в каких случаях целесообразно применение этого метода.
Материал: два одинаковых мазка из смеси туберкулёзной палочки (кислотоустойчивые бактерии) и кишечной палочки (кислотоподатливые бактерии).
Ход опыта: окрасить один мазок простым способом (метиленовым синим), другой – по Цилю-Нильсену. Микроскопировать.
Результат: два рисунка и описание их.
Вывод: (ответы, на вопросы, поставленные в цели опыта).
Изобразите принцип окраски по Цилю-Нильсену в виде схемы.