Выделение дезоксирибонуклеопротеинов из селезенки.

Нуклеопротеины

Доказательство наличия углевода в яичном альбумине.

Реакция на углеводную группировку (нафтоловая проба).

Реакции на белковую часть (биуретовая реакция).

Выделение муцина из слюны.

Гликопротеины.

Муцины пищеварительного тракта – гликопротеины, углеводная часть которых представлена мукополисахаридами. Они предохраняют слизистые оболочки от химических, механических, термических воздействий и переваривания протеолитическими ферментами.

В две пробирки собирают по 1 мл слюны и добавляют в каждую по каплям 1% раствор уксусной кислоты до появления сгустков муцина. Осадок муцина в пробирках осторожно промывают водой, придерживая сгусток палочкой.

Для открытия белка в пробирку с осадком муцина добавляют при помешивании 10% раствор гидроксида натрия до растворения сгустка и производят биуретовую реакцию. Положительный результат реакции доказывает белковую природу муцина.

Углеводы муцина обнаруживают нафтоловой пробой (реакция Подобедова - Молиша). Из гексоз под действием серной кислоты образуется оксиметилфурфурол. При взаимодействии его с α-нафтолом образуется окрашенный продукт конденсации.

Во вторую пробирку с осадком муцина добавляют 0,5 мл 1% спиртового раствора α-нафтола, перемешивают и по стенке осторожно наслаивают 0,5мл конц. серной кислоты. На границе раздела жидкостей постепенно появляется фиолетово-красное кольцо.

В пробирку наливают 4 мл разбавленного раствора яичного альбумина, прибавляют 0,5 мл 0,1%-ного раствора α-нафтола, хорошо перемешивают. По стенке осторожно наслаивают конц. серную кислоту. При стоянии на границе раствора наблюдают фиолетовое кольцо.

Контрольные вопросы

1. Какие белки называются сложными

2. Как образуется связь между полипептидной цепью и фосфорной кислотой в фосфопротеинах?

3. Почему для плода, зародыша, новорожденного особую роль играют фосфопротеины?

4. В чем различие между гликопротеинами и протеогликанами?

5. Какие типы связей существуют между углеводными компонентами и белками?

6. Почему гликопротеины менее чувствительны к действию денатурирующих факторов, чем простые белки?

Работа 3. Сложные белки – нуклеопротеины и хромопротеины

Дезоксирибонуклеопротеины (ДНП) выделяют из тканей, богатых клеточными ядрами (зобная железа, селезенка, сперматозоиды). ДНП растворяются в растворах солей средней концентрации, например в хлориде натрия (1 М), и снова осаждаются при разведении последних (до 0,15 М) в виде волокнистого нуклеопротеина.

В ступке растирают 5 г селезенки с равным количеством песка, добавляют 5 мл охлажденного 2 М раствора хлорида натрия, а затем постепенно небольшими порциями 25 мл охлажденного 1 М раствора хлорида натрия. Растирание продолжают 10-15 мин в ступке, охлаждаемой льдом. Полученную массу переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют 15 мин. Измеряют объем центрифугата и вливают его в шестикратный объем воды тонкой струей, медленно размешивая жидкость деревянной палочкой. Нуклеопротеин в виде нитей наматывается на палочку.

Если выделился хлопьевидный осадок, то ему дают отстояться, а остаток жидкости подвергают центрифугированию.