Сентября.
Сделать тонкий мазок культуры дрожжей, высушить на воздухе, зафиксировать (см. Химический способ фиксации). Окрасить мазок фуксином на 1 мин, затем смыть краситель водой на штативе. Добавить на мазок одну каплю 1 % раствора H2SO4 на 30 с, смыть водой. Окрасить мазок метиленовым синим на 1 мин, промыть водой, высушить на воздухе. Микроскопировать с иммерсией. На голубом фоне цитоплазмы видны красные зерна волютина.
Окраска волютина дрожжей по методу Омелянского
Химический способ фиксации
Физический способ фиксации
25,
Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или I и II пальцами правой руки за рёбра мазком кверху и плавным движением проводят 2—3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2 с.
Надёжность фиксации проверяют следующим приёмом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной поверхности левой кисти. При правильном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога (70—80 °C).
Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова, жидкость Карнуа, спирт-формол. Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10—15 минут и затем высушивают на воздухе.
26,
Для простого метода окрашивания микропрепаратов чаще всего пользуются основными анилиновыми красителями. Очень широко применяют метиловый синий, основной фуксин, кристаллический фиолетовый, тионин.
Этот метод ценен тем, что при его применении отсутствует опасность образования искусственных продуктов обработки, в возможности выявления некоторых функциональных особенностей микробной клетки.
Простой метод окрашивания может быть применен как для окрашивания убитых микробных клеток в фиксированных микропрепаратах, так и для прижизненной окраски микроорганизмов.
Окраска волютина по методу Леффлера
Тонкий фиксированный мазок культуры микроорганизмов (дрожжей) окрашивают метиленовым синим Леффлера в течение 3 мин. Мазок промывают водой, не высушивают, а накрывают покровным стеклом, микроскопируют при увеличении 40 или 90.
Зерна волютина на препарате окрашены в красновато-фиолетовый цвет, цитоплазма – в голубой.
27,
сложные методы окраски, позволяющие получить представление не только о форме, размерах, расположении клеток друг относительно друга, по позволяющие дифференцировать микробы и определять структурные детали микробных клеток. При сложных методах окраски мазков применяют два–три различных по цвету красителя, что позволяет дифференцировать микробы и выявить некоторые нюансы в деталях их строения. К таким методам относят окраску по Граму, Цилю–Нельсену, Нейссеру, Бурри–Гинсу, Романовскому–Гимзе и некоторые другие.
Сложные дифференциальные методы окраски. При сложных способах окраски на мазок воздействуют двумя красящими веществами, из которых один является основным, а другой — дополнительным. Кроме красящих веществ, при сложных способах окраски применяют различные обесцвечивающие вещества: спирт, кислоты и т. д.
28,
Среди сложных методов окраски большую ценность представляет способ окраски разработанный датским ученым Граммом, позволяющий дифференцировать микроорганизмы на две большие группы, называемые «грамположительными» и «грамотрицательными», что имеет большое значение при идентификации микроорганизмов.
Этот способ окраски называют дифференциальной окраской. В основе дифференциации микробов по Грамму лежит свойство клеточной оболочки и цитоплазматической мембраны.
Основой клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов является пептидогликан. У грамположительных микробов пептидогликан имеет несколько слоев, у грамотрицательных - он однослоен.
Окраска по методу Грама.
Метод предложен датским ученым Грамом в 1884 г.
Окраска по Граму относится к сложному способу окраски, когда на мазок воздействуют двумя красителями, из которых один является основны́м, а другой — дополнительным. Кроме красящих веществ при сложных способах окраски применяют обесцвечивающие вещества: спирт, кислоты и др.
Для окраски по Граму чаще используют анилиновые красители трифенилметановой группы: генциановый, метиловый фиолетовый или кристаллвиолет. Грамположительные Грам (+) микроорганизмы дают прочное соединение с указанными красителями и йодом. При этом они не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином Грам (+) микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет.
Грамотрицательные Грам (−) микроорганизмы образуют с основными красителями и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение. В результате микробы обесцвечиваются, а затем окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет.
29,
Окраску производят с помощью красителя метиленового голубого Лефлера.
Краситель (3-5 мин) наносят на фиксированный препарат, так, чтобы он полностью покрыл мазок, краситель сливают, препарат промывают струйкой воды, встряхивают, высушивают и микроскопируют под иммерсией.
Простые способы позволяют судить о величине, форме, локализации, взаимном расположении отдельных клеток, но с их помощью нельзя установить структуру микробов и часто их дифференцированное отношение к красителям.
Результаты и их обработка:
В норме кефирная закваска представлена кефирным зерном. Промышленная закваска представляет:
- Streptococcus lactis,
- Streptococcus diacetilactis,
- Lactobacillum caucasicum (палочки, ведущие молочнокислое брожение).
- Дрожжи — Saccharomyces Kifiri (клетки – большие, ядерные, почкуются). Ведут спиртовое брожение.
В свежем кефире должно содержаться 0.8 – 1% дрожжей, завышенное содержание дрожжевых клеток указывает на продолжительное хранение продукта в условиях продолжающего роста микрофлоры. Streptococcus Lactis в свежем кефире находится в стрептоформе, при продолжительном хранении чаще встречаются одиночные кокки.
30,
Элективные культуры - клетки микроорганизмов, выращенные на избирательных (элективных) питательных средах. Предложены русским микробиологом С. Н. Виноградским (См. Виноградский). Благодаря специально подобранному составу элективных сред создаются условия, благоприятные для преимущественного роста микроорганизмов с определёнными физиологическими свойствами.
31,
Acetobacteraceae или Уксуснокислые бактерии это семейство бактерий, которые получают энергию, окисляя этанол до уксусной кислоты и поэтому, часто развиваются вслед за дрожжами, используя продукт спиртового брожения как субстрат для роста. Это грамотрицательные,аэробные, палочковидные бактерии, слабоподвижные за счет перитрихиально или полярно расположенных жгутиков, или неподвижные. Довольно требовательны к субстратам для роста. Почти все виды нуждаются в отдельных витаминах, в первую очередь в пантотеновой кислоте, однако есть формы, способные к синтезу всех факторов роста