Техника микроскопирования

Место для микроскопа выбирают дальше от прямого солнечного света. Работа на столе с темной поверхностью меньше утомляет глаза. Лучше смотреть в окуляр левым глазом, не закрывая правого. При работе с бинокулярной насадкой сначала регулируют расстояние между окулярами в соответствии с расстоянием между глазами наблюдателя так, чтобы поля зрения обоих окуляров сливались в одно.

Переносят микроскоп, держа одной рукой за штатив, другой – за основание микроскопа. Следует предохранять микроскоп от толчков, соприкосновения с сильнодействующими веществами типа кислот, щелочей. Не рекомендуется вынимать окуляр из трубы, чтобы не затрагивать пылью трубу и объективы. Во время работы желательно защищать микроскоп от дыхания, так как конденсация паров ведет к его порче.

Линзы должны быть всегда чистыми. Микроскоп следует хранить в чехле. Нельзя касаться пальцами оптических поверхностей.

Осветитель. При работе с микроскопом можно пользоваться рассеянным дневным светом при искусственном освещении. В современных микроскопах источник света вмонтирован в основание микроскопа. Для искусственного освещения микроскопов, не имеющих такого устройства, используют специальные осветители.

Освещение поля зрения. В учебных микробиологических лабораториях в качестве источникам искусственного освещения часто применяют общие лампы дневного освещения, установленные на расстоянии 0,5-0,8м. Микроскоп помещают перед источником света. С помощью револьвера закрепляют объектив с увеличением 8х. Легкий щелчок и звук щелчка пружины револьвера свидетельствует о том, что объектив установлен по оптической оси. Макрометрическим винтом опускают объектив на расстояние 0,5-1,0 см от предметного столика. Полностью открывают диафрагму и поднимают конденсор до упора. Смотрят в окуляр и, поворачивая зеркало, направляют лучи от источника света через отверстие ирисовой диафрагмы на объектив. При микроскопировании окрашенных препаратов верхняя линза конденсора должна находиться на уровне предметного столика и диафрагма должна быть открытой. При просмотре неокрашенных препаратов желаемую степень освещения регулируют, слегка опустив конденсор и прикрыв ирисовую диафрагму.

Правило работы с сухими объективами Приготовленный препарат помещают на предметный столик и закрепляют зажимами. С помощью сухого объектива с увеличением 8х просматривают несколько полей зрения. Передвигают предметный столик боковыми винтами. Нужный для исследования участок препарата устанавливают в центре поля зрения. Поднимают тубус и вращением револьвера переводят объектив с увеличением 40х. Наблюдают сбоку. Макрометрическим винтом опускают тубус с объективом почти до соприкосновения с препаратом. Смотрят в окуляр, очень медленно поднимают тубус до появления контуров изображения. Точную фокусировку производят с помощью микрометрического винта, вращая его в ту или другую сторону, но не более чем на один полный оборот. Если при вращении микрометрического винта чувствуется сопротивление, значит, ход его пройден до конца. В этом случае поворачивают винт на один – два полных оборота в обратную сторону, снова находя изображение при помощи макрометрического винта и переходят к работе с микрометрическим винтом. При смене объективов не следует забывать, что разрешающая способность микроскопа зависит от соотношения апертуры объектива и конденсора. Числовая апертура объектива с увеличением 40х составляет 0,65, неиммерсионного конденсора – 0,95. Привести их в соответствие практически можно следующим приемом: сфокусировав препарат с объективом, следует вынуть окуляр и, глядя в тубус, прикрывать ирисовую диафрагму конденсора до тех пор, пока ее края не станут видны у границы равномерно освещенной задней линзы объектива. В этот момент числовые апертуры конденсора и объектива будут примерно равны.

Правило работы с иммерсионным объективом. На сухой фиксированный окрашенный препарат наносят каплю иммерсионного масла. Поворачивают револьвер и устанавливают иммерсионный объектив с увеличением 90х. Конденсор поднимают вверх до упора. Ирисовую диафрагму конденсора открывают полностью. Глядя сбоку, макрометрическим винтом опускают тубус до погружения объектива в масло, почти до соприкосновения фронтальной линзы с предметным стеклом препарата. Это нужно проводить очень осторожно, чтобы фронтальная линза не сместилась и не получила повреждения. Смотрят в окуляр, очень медленно вращая макрометрический винт на себя и, не открывая объектив от масла, приподнимают тубус до появления контура объекта. При этом следует помнить, что свободное рабочее расстояние в иммерсионном объективе 0,1 – 0,15мм. Затем точную фокусировку производят микрометрическим винтом. Рассматривают в препарате несколько полей зрения, передвигая столик боковыми винтами

Если изображение не резкое, тусклое или плывет, что-то сделано неправильно: загрязнена фронтальная линза объектива, мешают пузырьки воздуха в масле, случайно закрыта диафрагма, сдвинута лампа или зеркало. Причину некачественного изображения надо устранить.

По окончании работы поднимают тубус, снимают препарат и осторожно протирают фронтальную линзу объектива хлопчатобумажной салфеткой, смоченной очищенным бензином. Оставлять масло на поверхности линзы нельзя, так как оно способствует оседанию пыли и может привести со временем к повреждению оптики микроскопа.