Развернутая реакция агглютинации

Методика постановки реакции агглютинации на стекле с целью сероидентификации

Реакция агглютинации

Знать:

1. Антигены микробной клетки

2. Суть реакции агглютинации и ее компоненты

3. Виды реакции агглютинации

4. Применение и направления реакции агглютинации

5. Алгоритмы постановки реакции агглютинации

Уметь:

1. Поставить и учесть РРА

2. Поставить и учесть ОРА

Агглютинация — это склеивание бактерий под действием соответствующих антител (образование комплекса АГ+АТ — невидимая фаза). Склеенные бактерии в присутствии электролитов (соли натрия) выпадают в осадок, образуя хлопья — видимая фаза.

Агглютиногены — антигены бактериальной клетки (O, K, H, Vi). Различают:

1. Групповые антигены — общие для различных видов микроорганизмов одного рода.

2. Видовые антигены — общие для микроорганизмов одного вида.

3. Типовые антигены — общие для сероваров внутри микроорганизмов одного вида

Агглютинины — антитела вызывающие склеивание бактерий.

Агглютинат — хлопьевидный белый осадок склеенных бактерий. Различают:

1. Мелкозернистый осадок (О-агглютинация) — мелкие хлопья

2. Хлопьевидный осадок (Н-агглютинация) — крупные хлопья.

Реакции агглютинации применяются для диагностики бактериальных инфекций в направлениях серодиагностики и сероидентификации. Виды РА:

1. Ориентировочная РА — ставится на предметном стекле для сероидентификации (серотипирования) — определяют вид и серотип выделенного возбудителя.

2. Развернутая РА — ставится в пробирках для серодиагностики и сероидентификации.

Компоненты реакции:

1. Культура, выделенная от больного

2. Иммунная сыворотка

3. Физиологический раствор

На обезжиренное предметное стекло наносят две капли иммунной адсорбированной сыворотки и одну каплю физиологического раствора. Неадсорбированные сыворотки предварительно разводят физ. раствором 1:5. Капли наносят на равномерное расстояние друг от друга и маркером отмечают:

1. Первая капля — рС (рабочая сыворотка)

2. Вторая капля — кС (контроль сыворотки)

3. Третья капля — кА (контроль антигена — физ. раствор)

Культуру бактерий вносят в каплю с физ. раствором и тщательно растирают, а затем не прожигая петлю вносят материал в рабочую сыворотку. Нельзя вносить культуру из сыворотки в физ. раствор. Реакция протекает при комнатной температуре. Учет реакции проводят через 3-5 минут. Контроль сыворотки всегда должен оставаться прозрачным, а в контроле антигена всегда должна наблюдаться равномерная муть. Если сыворотка мутная (хилезная) или розовая, ее бракуют и реакцию переделывают.

Результат реакции считается положительным, если в рабочей сыворотке появляется хлопьевидный осадок на фоне прозрачной сыворотки. При отрицательном результате в капле с рабочей сывороткой видна равномерная муть, как в капле с физ. раствором.

Реакция отчетливее видна невооруженным глазом на темном фоне в проходящем свете. При ее изучении можно пользоваться агглютиноскопом или лупой.

Знать:

1. Сущность развернутой реакции агглютинации

2. Компоненты, участвующие в реакции, характеристику, подготовку их для постановки реакции.

3. Методику проведения учета реакции.

Уметь:

1. Подготовить компоненты, участвующие в реакции, к работе

2. Поставить основной опыт реакции и контроль

3. Провести дезинфекцию рабочего места и рук