Лабораторна робота №14

Тема: Виділення дезоксирибонуклеїнової кислоти (ДНК)

Мета: навчитись виділяти ДНК з різних продуктів

Завдання:

Теоретична частина:

1. ДНК, особливості структурної організації молекули ДНК.

2. Біохімічні докази генетичної функції ДНК.

3. Біологічна роль ДНК.

4. Мутагени. Репарація пошкоджень ДНК.

5. Генетичний код, його роль.

Принцип. Як відомо, ДНК, є в кожній клітині, а значить, виділити її можна з будь-якої тканини – навіть з кісток тварин, луски риб або деревини, де клітин не так вже багато в порівнянні з об'ємом позаклітинної речовини.
У насінні рослин відносний, вміст ДНК вищий, ніж у стеблі, а з молодих зростаючих пагонів її можна виділити істотно більше, ніж з такого ж за обсягом здерев'янілого стовбура.

Хід роботи. Рослинний матеріал, що містить багато ДНК (банан, зелений горошок, морква, та ін.) покладіть в міксер додайте 1/8 чайної ложки солі і 200 мл холодної води. Збивайте протягом 15 секунд. Процідіть суміш через фільтр. В отриману м'якоть додайте 1/6 від її кількості рідкого миючого засобу і добре розмішайте. Залиште на 5-10 хвилин. Нахиліть пробірку і повільно влийте в неї трохи етилового спирту, щоб він утворив шар поверх суміші. Лити слід доти, доки спирту та суміші не виявиться порівну. ДНК спливе наверх у вигляді пластівців. Дерев'яною паличкою (олівцем) виловите їх і розгляньте під мікроскопом.

Рис. 1. Методика виділення ДНК

1 – 2. Етап подрібнення матеріалу;

3 – 4 – етап додавання миючого засобу;

5 – етап додавання спирту;

6 – виділення ДНК

Контрольні запитання:

1. Записати структурні формули:

а) уридин; б) тимідин; в) аденозін; г) цитидін; д) гуанозін; е) АМФ ж) дГМФ; з) дЦМФ; и) УМФ.

2. Які нуклеїнові кислоти менш чутливі до денатурації:

а) А-Т пар > Г-Ц пар.

б) Г-Ц пар > А-Т пар.

3. У виділеному з кишечної палички розчині нуклеїнових кислот виявили аденін, гуанін, цитозин, фосфорну кислоту. Які реакції підтверджують, що виділили ДНК?

4. У виділеній з селезінки речовині виявлені: дезоксирибоза, тимін, аденін, гуанін, цитозин, фосфорна кислота. Назвіть сполуку, яка виділена.

5. У гідролізаті дріжджів виявлені рибоза, аденін, гуанін, цитозин, урацил. До складу якої сполуки входять ці компоненти?