Биологические свойства

Морфология. L.monocytogenes, неспорообразующая, полиморфная, грам “+” палочка, в старых культурах может быть грам “-” с закругленными концами, размером 0,3-0,5х0,5-2 мкм, располагается поодиночке, парами, полисадами по пять и более палочек или в виде римской цифры V. Листерии способны принимать кокковидную или овальную форму, можно встретить диплококки, а также биполярно окрашенные микробы. Установлены L-формы. Подвижность листерий четко выражена в 4-12 часовых культурах, выращенных при 20-22⁰С (при 38⁰С – отсутствует).

Культуральные свойства. Листерии – факультативные анаэробы. Особенностью листерий является широкий температурный диапазон роста: от 45⁰ до 4, рН от 5 до 11 ( в лаборатории культивируют при 37⁰, рН 7,2 – 7,4)

Для культивирования применяют обычный или печеночный агар и бульон с добавлением 1% глюкозы и 2-3% глицерина, а также кровяной агар и элективные среды (МПА с добавлением водно-глицеринового раствора теллурита калия и др.). Характерным для возбудителя листериоза является легкое помутнение бульона (на 5-7 слизистый осадок, при встряхивании – спиралевидная косичка) и появление мелких росинчатых колоний (голубоватый оттенок в проходящем свете) и наличие бета-гемолиза на кровяном агаре.

Биохимические свойства. Листерии разлагают с образованием кислоты (без газа) глюкозу, мальтозу, рамнозу, салицин и трегалозу и не разлагают дульцит, инулин, раффинозу. Не образуют индола и H₂S, не разжижают желатин, не восстанавливают нитраты в нитриты, дают положительную пробу на каталазу, обесцвечивают индикаторные среды (с лакмусом, нейтральротом в смеси с метиленовой синью и др.).

Антигенная структура.Имеются два антигена: соматический и жгутиковый. Установлено семь основных серологических типов, многие из которых подразделены на подтипы.

Патогенность. Листерии патогенны для многих видов млекопитающих, в том числе грызунов, хищных и копытных, а также для птиц и человека. Листерии вызывают листериоз – заболевание характеризуется септическими явлениями, поражением ц.н.с., абортами, маститами.

Листерии продуцируют нейротоксин, гемотоксин и ряд факторов распространения. Патогенность также обусловлена эндотоксином. Эпизоотологической особенностью листериоза является длительное листерионосительство. Листерионосители могут играть определенную роль в возникновении и сохранении стационарных очагов болезни.

Инфицирование животных происходит в основном алиментарным путем через слизистую оболочку губ, полости рта и глотки. В организме распространяются: гематогенным, лимфогенным и нейрогенным путями. Различают септическую и нервную формы болезни. Септическая форма листериоза встречается почти исключительно у молодняка в первые недели и месяцы жизни, когда защитные силы организма невелики. Нервная форма проявляется менингоэнцефалитом, при этом листерии обнаруживаются только в головном и спинном мозге. У беременных животных листерии вызывают гибель плодов и аборты.

Устойчивость. Листерии довольно устойчивы во внешней среде. В почве они сохраняются от 6 до 11 месяцев, в воде – до 1 года, в навозе – до 7 месяцев, в силосе – более года, в мясе – до года. Погибают при 100⁰С – через 10-15 мин; 2,5%-й раствор формальдегида и 2,5%-й раствор NaOH инактивируют возбудителя через 20 мин.

3. Лабораторная диагностика.

Для исследования в лабораторию направляют трупы мелких животных или голову (головной мозг), паренхиматозные органы (часть печени, селезенку, почку, пораженные участки легких), абортированный плод и его оболочку. Для прижизненной диагностики – кровь или сыворотку крови, истечения из половых органов абортировавших самок, молоко из пораженных долей вымени при наличии маститов.

Бактериологическая диагностика включает микроскопическое исследование исходного материала, посевы на питательные среды, идентификацию выделенных культур по культурально-биохимическим и серологическим свойствам, а также постановку биопробы на лабораторных животных.

Мазки окрашивают по Граму, а также методами флуоресцирующих антител (по ним ставится диагноз). Из органов и головного мозга делают обильные посевы на питательные среды, а также на кровяной агар и элективные среды. Рекомендуется часть материала сохранять в холодильнике в течение 30 дней (при +4⁰С происходит размножение и накопление листерий) для проведения повторных исследований через каждые 10 дней при отрицательном результате первичного посева.

Посевы инкубируют в термостате при 37⁰С с ежедневным просмотром в первые 3-4 дня. Если роста нет, то наблюдают до 2 недель.

Выделенные культуры исследуют на подвижность, изучают ферментативные свойства на средах Гисса, ставят пробу на каталазу и дифференцируют от возбудителя рожи свиней (посев на индикаторные среды). Ставят капельную РА для определения серотипа с помощью поливалентных и типовых сывороток. Для типирования используются также бактериофаги.

Специфические свойства листерий проверяют также конъюктивальной пробой на морских свинках или в\к пробой на морских свинках или кроликах.

Биологическое исследование проводят для получения чистых культур и определения их вирулентности. Используют 2-3-е белых мышей, которых заражают п\к или в\б суспензией из головного мозга, или внутренних органов, или культурой в дозе 0,3-0,5 мл. При положительной биопробе животные погибают через 2-6 суток после заражения. На вскрытии – множественные некротические очажки в печени, селезенке, почках.

Серологические методы (РА. РНГА, РСК) применяют для выяснения эпизоотической ситуации в хозяйствах, где диагноз на листериоз поставлен комплексным методом с выделение культуры.

1. Диагноз на листериоз считается установленным при получении положительного результата РНФ (реакция нарастания титра фага).

2. Обнаружение листерий в патматериале иммунофлюоресцентным методом.

3. При выделении грам “+” полиморфной подвижной палочки, образующей каталазу и разлагающей с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, трегалозу и салицин; вызывающей (вирулентные штаммы) положительную конъюктивальную и дермонекротическую пробы у морских свинок и кроликов; дающей положительную РА с листериозной сывороткой; лизирующейся листериозным бактериофагом, обладающей патогенностью для лаб. животных (вирулентные штаммы).