План изучения темы.
Исходный уровень знаний.
Антигены и антитела. Реакции иммунитета.
Занятие 10
Запись в тетради
Цель опыта: определить титр лизоцима в слюне(ротовой жидкости).
Материал: слюна, суспензия микрококка, физраствор.
Ход опыта: начертить таблицу- номера пробирок, разведение слюны.
Результат: отметьте, в каких пробирках произошёл лизис бактерий.
Вывод: укажите титр лизоцима.
3. Изучение явления фагоцитоза. Промикроскопируйте и зарисуйте препарат фагоцитоза стафилококков.
4. Изучение незавершённого фагоцитоза. Промикроскопируйте и зарисуйте препарат из гноя больного гонореей.
Цель самоподготовки.
После самостоятельного изучения материала необходимо знать:
- антигены, способы их получения и практическое применение;
- антитела, их свойства, строение, структурные основы специфичности; процесс антителогенеза;
- реакции иммунитета, механизм, ингредиенты, методы постановки, практическое применение.
Для усвоения материала темы необходимо повторить структуру простых и сложных белков, структуру иммуноглобулинов, клетки крови и органов иммунной системы; резус–фактор и антитела к нему.
Цель занятия.
1. Выработать чёткое преставление:
- об антигенах, их разнообразии, свойствах;
- об антителах, их строении, классах иммуноглобулинов, их роли.
2. Изучить:
- строение и функционирование иммунной системы;
- специфические формы иммунного ответа: клеточный и гуморальный ответы, иммунологическая память, иммунологическая толерантность;
- механизмы взаимодействия антиген-антитело: принципы и методы постановки реакций агглютинации и преципитации.
3. Научиться интерпретировать результаты серологических исследований.
1. Антигены микробов.
2. Антитела.
3. Реакции иммунитета: реакция нейтрализации токсина антитоксинами, реакция агглютинации, реакция преципитации.
После изучения темы студент должен уметь.
1. Поставить реакцию агглютинации на стекле, развёрнутую реакцию агглютинации, реакцию кольцепреципитации в пробирках.
2. Учесть готовый результат развёрнутой реакции агглютинации в пробирках; учесть и оценить реакцию преципитации в агаре.
Контрольные вопросы.
Приобретённый иммунитет, отличие его от наследственного (видового, врождённого). Виды приобретённого иммунитета.
Задача. В семье заболел дифтерией ребенок Валерий, 3 лет. Другие члены семьи не заболели, причём мать переболела дифтерией в детстве, а отец был привит дифтерийным анатоксином. Старшая сестра Наташа, 5 лет, в своё время не была привита дифтерийным анатоксином из-за медицинских противопоказаний, поэтому пришлось провести ей экстренную профилактику с помощью противодифтерийной антитоксической сыворотки. Младший брат, Виталий, 3-х месяцев, не заболел, хотя ничем не был привит. В доме есть кошка и собака, они не заболели. Назовите для каждого из членов семьи и для животных вид иммунитета, благодаря которому они не заболели.
Что такое антиген? Какие вещества могут быть антигенами? Полноценные антигены и гаптены, чем они отличаются друг от друга? Структура антигена. Как называется часть молекулы антигена, определяющая его специфичность? Назовите известные Вам антигены. Что такое аутоантигены? Антигенное строение микробной клетки. Жгутиковые и соматические антигены; локализация, буквенное обозначение, химическая природа, отношение к температуре, способ получения, практическое применение. Видоспецифические, типоспецифические и группоспецифические антигены микробов, их практическое значение для идентификации микроорганизмов. Антигены организма человека, аутоантигены. Антигены главного комплекса гистосовместимости (МНС) и их роль в формировании иммунного ответа в реакциях отторжения трансплантата. Анатоксин, его свойства, применение, получение. Какая ткань составляет иммунную систему организма? Укажите центральные и периферические органы иммунной системы человека. Опишите процесс формирования гуморального и клеточного иммунного ответа. Укажите клетки, которые осуществляют захват и переваривание антигена; клетки, которые взаимодействуют при формировании гуморального иммунитета, клеточного иммунитета; клетки, которые трансформируются и превращаются в плазмоциты, продуцирующие антитела; клетки, стимулирующие этот процесс; клетки, которые угнетают иммунный ответ; клетки, которые убивают опухолевые клетки, и заражённые вирусом клетки. Что такое антитела? Как получить иммунную сыворотку? Как получить сыворотку, которая бы нейтрализовала столбнячный токсин? Против каких антигенов образуются антитоксины, агглютинины, гемолизины? Какие антитела образуются при введении в организм дифтерийного анатоксина? дифтерийных бактерий? Химическая природа и структура антител. Что такое активный центр иммуноглобулина? Перечислите классы иммуноглобулинов, их свойства. Укажите класс иммуноглобулинов, способных проникать через плаценту. К какому классу относятся секреторные иммуноглобулины? Динамика накопления антител. Чем отличается вторичный иммунный ответ от первичного? Как в практической медицине используются знания о динамике иммунного ответа? Что такое реакции иммунитета, каков их механизм, фазы реакции. В каких 2-х направлениях используют реакции иммунитета? Перечислите реакции иммунитета.
Задача. Поставьте вместо пропущенных слов «анатоксин» или «антитоксин»: _________ является антигеном, _________ является антителом, __________ создает при введении в организм активный иммунитет, __________ создает при введении в организм пассивный иммунитет, __________ получают путём иммунизации животных, ___________ получают из токсина при воздействии формалином и теплом, ___________ нейтрализует токсины, __________ вызывает в организме образование антител.
Реакция агглютинации: что такое агглютинация, что является антигеном, что - антителом; методы постановки, какие контроли ставятся и для чего; как должны выглядеть контроли? Агглютинирующие сыворотки, что они содержат, как их получают, для чего применяются; что такое титр агглютинирующей сыворотки? Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации: что служит антигеном в этой реакции, как его получают, механизм реакции? Что такое эритроцитарный диагностикум? Что такое антительный эритроцитарный диагностикум? Реакции преципитации: что такое преципитация, что служит антигеном; как получить преципитирующую сыворотку? Что такое титр преципитирующей сыворотки? Методы постановки, практическое применение.
Задача. На одежде человека, обвиняемого в убийстве, обнаружено пятно крови. С помощью какой реакции можно определить, человеческая ли это кровь; что в этой реакции будет антигеном, и что антителами; какой диагностический препарат нужно иметь в лаборатории для этой реакции, как его приготовляют?
Задача. Как при помощи реакции преципитации определить, является ли доставленный для анализа образец мяса крупного рогатого скота или мясом лошади; какие необходимы диагностические препараты?
Реакция преципитации в агаровом геле, способы постановки, практическое применение.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
Составьте таблицу «Реакции иммунитета» по схеме:
Реакция иммунитета | Антиген | Антитела | Проявление реакции | Способы постановки | Применение |
Таблица будет продолжена на следующем занятии.
Работа студента на практическом занятии.
1. Демонстрация развёрнутой реакции агглютинации.
Цель опыта: определить титр агглютинирующей сыворотки.
Материал: агглютинирующая сыворотка, взвесь бактерий, физиологический раствор.
Ход опыта: начертить таблицу: Номера пробирок, разведение сыворотки.
Порядок постановки. Взять 6 пробирок. Во все пробирки налить по 1 мл физиологического раствора. Затем в 1 пробирку налить 1 мл агглютинирующей сыворотки, разведенной 1:50. Перенести 1 мл из 1-ой во 2-ю, из 2-ой в 3-ю, из 3-й в 4-ю, из 4-й в 5-ю, а из 5-ой пробирки вылить 1 мл в дезинфицирующий раствор. Добавить по 2 капли антигена во все пробирки. Поставить на 2 часа в термостат, после чего учесть результат.
Номера пробирок | ||||||
Физ. раствор, мл | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 |
Агглютинирующая сыворотка в разведении 1:50, мл | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1мл вылить |
Антиген (взвесь бактерий в каплях) | ||||||
Разведение сыворотки | 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | 1:1600 | контроль антигена |
Результат |
Результат: отметьте, в каких пробирках произошла агглютинация.
Вывод: укажите титр сыворотки.
2. Постановка реакции агглютинации на стекле.
Цель опыта: определить, являются ли антигены бактерий и антитела иммунной сыворотки специфичными друг для друга.
Материал: физиологический раствор, иммунная сыворотка, культура бактерий на скошенном агаре.
Ход опыта: нарисуйте.
Результат: отметьте на рисунке.
Вывод: сформулируйте.
3. Изучите реакцию пассивной гемагглютинации по таблице и по демонстрационной реакции.
4. Постановка реакции преципитации.
Цель опыта: определить видовую принадлежность белка крови.
Материалы: вытяжка из кровяного пятна, преципитирующие сыворотки против белка человека и белка барана.
Ход опыта: таблица.
Результат: отметьте, в какой пробирке произошла преципитация.
Вывод: сформулируйте.
5. По демонстрационной реакции преципитации в агаровом геле определите токсигенность дифтерийных палочек. Укажите, какие культуры являются токсигенными.
6. Изучите диагностические препараты. Препараты, содержащие антиген: диагностикумы, эритроцитарные диагностикумы. Препараты, содержащие антитела: агглютинирующие сыворотки, преципитирующие сыворотки.