Выпускаемых сухих сред 8 страница

9.2.2.2 Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранных фильтров

Метод основан на фильтрации установленного объема воды через мембранные фильтры, выращивании посевов на дифференциально-диагностической среде и последующей идентификации выросших колоний.

Для анализа точно отмеряют 100 см³ воды и фильтруют этот объем через стерильный мембранный фильтр. После окончания фильтрования фильтр осторожно приподнимают фламбированным пинцетом и переносят в чашку Петри со средой Эндо. Поверхность фильтра с осевшими на ней микроорганизмами должна быть обращена вверх. Чашки с фильтрами ставят в термостат дном вверх и инкубируют посевы при температуре 37 ⁰С в течение 24 часов.

Результат считается отрицательным, если на фильтрах вообще не выросли колонии, или выросли колонии с неровными краями и поверхностью.

При наличии типичных лактозоположительных колоний, дающих отпечаток на обратной стороне мембранного фильтра и среде – темно красных, красных с металлическим блеском, а также лактозоотрицательных – розовых без отпечатков, подсчитывают число колоний каждого типа.

Для идентификации отбирают не менее 5 колоний каждого вида и делают посев на скошенный питательный агар. Посевы инкубируют при 37⁰С в течение 16-18 часов. Далее проводят биохимические тесты с чистыми культурами: оксидазный тест и тест образования кислоты и газа при ферментации лактозы при температуре 37 ⁰С для определения общих колиформных бактерий и при 44 ⁰С при определении термотолерантных колиформных бактерий.

9.2.2.3 Определение содержания общих и термотолерантных колиформных бактерий титрационным методом

Метод бродильных проб (или титрационный метод) основан на накоплении бактерий после посева установленного объема воды в жидкую накопительную среду, с последующим пересевом на дифференциально-диагностическую среду для идентификации выросших колоний.

Титрационный метод может быть использован:

· при отсутствии материалов и оборудования, необходимых для выполнения анализа методом бродильных проб;

· при анализе воды с большим содержанием взвешенных частиц;

· в случае преобладания в воде посторонней микрофлоры, препятствующей получению на фильтрах изолированных колоний общих колиформных бактерий.

Первый этап исследования заключается в посеве 3-х объемов воды по 100 см³ в концентрированную лактозопептонную среду. Посевы инкубируют при температуре 37 ⁰С в течение 24-48 часов для определения общих колиформных бактерий и при 44 ⁰С – при определении термотолерантных колиформных бактерий в течение 24±2 часов. Если в колбах не обнаружены признаки роста (об этом судят по отсутствию газа в поплавках) то колиформные бактерии отсутствуют в 100 см³.

На втором этапе исследований из пробирок и колб, где отмечено наличие роста и образование газа, производят высев петлей в сектора среды Эндо. Посевы на среде Эндо выдерживают в термостате при 37 ⁰С в течение 18-20 часов. Отсутствие колоний, типичных для бактерий группы кишечных палочек, дает отрицательный ответ о содержании этих микроорганизмов в исследуемом объеме воды.

9.2.2.4 Определение споровых сульфитредуцирующих клостридий

прямым посевом

Из каждой пробы воды делают посев 20 см³ в железосульфитный агар. Для этого в стерильные пробирки вносят по 10 см³ в 2 пробирки объемом 30 см³ или по 5 см³ в 4 пробирки вместимостью 15 см³. Посевы заливают горячим (75…80 ⁰С) железосульфитным агаром в количестве, превышающем объем воды в 2 раза. Среду заливают по стенке пробирки, избегая образования пузырьков воздуха. После этого пробирки быстро охлаждают, помещая их в емкость с холодной водой для создания анаэробных условий. Посевы инкубируют при 44 ⁰С в течение 24±2 часов. Если после культивирования не наблюдается почернения среды в пробирках, то считают, что сульфитредуцирующие клостридии отсутствуют в 20 см³.

9.2.3 Исследование чистоты рук

Закрепленный на деревянном или металлическом стержне стерильный тампон смачивают стерильной водой (или физиологическим раствором) и протирают ими ладони, тыльную поверхность рук, под ногтями и между пальцами обеих рук. Тампон погружают в пробирку с водой, в которой проводилось смачивание, содержимое пробирки хорошо взбалтывают, отбирают 1 см³ и готовят разведения (1:10 и 1:100).

Для определения КМАФАнМ проводят посев разведений в чашки Петри на мясопептонный агар с последующим термостатированием при 37⁰С в течение 48 часов. Остаток смыва вместе с тампоном высевают в пробирки с 5 см³ среды Кесслера и проводят культивирование при 43 ⁰С в течение 24 часов.

Учет результатов исследований. Чистоту рук оценивают по количеству микроорганизмов в 1 см³ смыва при отсутствии газообразования в пробирке со средой Кесслера с поплавком (при отсутствии кишечной палочки). При оценке состояния рук по содержанию в смывной воде мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) руководствуются описанием, изложенным в разделе 4.1.4 данной лабораторной работы.

2-е занятие

На втором занятии студенты исследуют:

- посевы воздуха на мясопептонном агаре и на среде Сабуро. Подсчитывают количество выросших колоний и по формуле Омелянского (раздел 4.2.1.) определяют количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, содержание грибов и дрожжей в 1 м³ воздуха. Определение качественного состава микрофлоры воздуха проводят по методикам, описанным в разделах 2.2.4 и 2.2.5. На основании результатов исследований делаются выводы о санитарном состоянии и качественном составе микрофлоры воздуха.

- посевы водопроводной воды на мясопептонном агаре и среде Кесслера. Подсчитывают количество выросших колоний на мясопептонном агаре. Если в чашках выросло более 50 колоний, то санитарное состояние воды неудовлетворительное. Внимательно рассматривают посевы воды на жидкой накопительной среде (лактозо-пептонной среде или среде Кесслера). Если на среде есть рост, то лаборанты к занятию делают пересев на среду Эндо. Студенты рассматривают посевы в чашках Петри на среде Эндо и при наличии типичных колоний готовят фиксированные мазки, окрашивают их по Граму. Если в мазках при микроскопии с объективом на х90 обнаруживаются грамотрицательные мелкие палочки, располагающиеся по одиночке, без спор, то считают, что в исследуемой пробе воды присутствуют кишечные палочки и делают вывод о том, что исследованная вода не соответствует требованиям СанПиНа и в 100 см³ воды обнаружены общие колиформные бактерии.

- посевы с рук на мясопептонном агаре и среде Кесслера. Делают вывод о чистоте рук согласно описанию, изложенному в разделе 4.2.3.

Контрольные вопросы

1. Какая служба осуществляет государственный санитарный надзор на предприятиях молочной промышленности?

2. Какие формы государственного санитарного надзора Вы знаете?

3. какими полномочиями наделены органы и учреждения государственного санитарного надзора?

4. Кто осуществляет внутриведомственный санитарный надзор на предприятиях молочной промышленности?

5. По каким микробиологическим показателям проводят оценку санитарно-гигиенического состояния воздуха?

6. В чем сущность седиментационного метода определения микроорганизмов в воздухе?

7. В чем заключается сущность аспирационного метода определения микроорганизмов в воздухе?

8. Каким образом можно снизить бактериальную обсемененность воздуха?

9. Какие микробиологические показатели определяются согласно ГОСТу в питьевой воде для оценки ее санитарного состояния?

10. Каким образом готовятся смывы с оборудования для оценки его санитарного состояния?

11. Как проводят контроль чистоты трубопроводов, шлангов, рукавов?

12. Какие микробиологические показатели определяют в смывах с оборудования, трубопроводов, посуды?

13. Каким образом проводят микробиологический контроль вспомогательных и упаковочных материалов?

14. Как определить качество мойки и дезинфекции посуды?

15. Как проводят микробиологический контроль чистоты рук работников?

16. Как проводят контроль обработки рук работников хлорной известью?

17. Как определить содержание микроорганизмов в 1 м³ воздуха?

18. Что такое коли-титр, коли-индекс воды?

19. Какие способы обеззараживания воды Вам известны?

20. Каким образом определяется коли-титр и коли-индекс в питьевой воде?

21. Как рассчитывается содержание микроорганизмов в 1 м³ воздуха при использовании седиментационного метода?

22. Какие микроорганизмы являются санитарно-показательными для воздуха и как они определяются?