Дифференциальная окраска хромосом
Этапы кариотипирования
В настоящее время наряду с рутинными методами изучения кариотипа используются методы дифференциальной окраски, позволяющие выявить в хроматидах чередование окрашенных и неокрашенных полос. Они называются бэндами и имеют специфическое и точноераспределение, обусловленное особенностями внутренней организации хромосомы
Методы дифференциальной окраски были разработаны в начале 70-х годов ХХ-го века и стали важной вехой в развитии цитогенетики человека. Они имеют широкое практическое применение, т.к.:
- чередование полос не носит случайный характер, а отражает внутреннюю структуру хромосом, например распределение эухроматиновых и гетерохроматиновых участков, богатых AT или GC последовательностями ДНК, участков хроматина с разной концентрацией гистонов и негистонов;
- распределение бэндов идентично для всех клеток одного организма и всех организмов данного вида, что используется для точной идентификации вида;
- метод позволяет точно идентифицировать гомологичные хромосомы, которые являются одинаковыми с генетической точки зрения и имеют сходное распределение бэндов;
- метод обеспечивает точную идентификацию каждой хромосомы, т.к. разные хромосомы имеют разное распределение бэндов;
- дифференциальная окраска позволяет выявить многие структурные нарушения хромосом (делеции, инверсии), которые с трудом обнаруживаются методами простой окраски.
В зависимости от способа предобработки хромосом и техники окрашивания различают несколько методов дифференциальной окраски (G,Q,R,T,C). Используя их, можно получить чередование окрашенных и неокрашенных полос - бэндов, стабильных и специфичных для каждой хромосомы.
Характеристика различных методов дифференциальной окраски хромосом
Название метода | Используемый краситель | Природа бэндов | Практическая роль |
Метод G | Giemsa | Окрашенные - гетерохроматин; неокрашенные - эухроматин | Выявление численных и структурных аномалий хромосом |
Метод Q | Куинакрин (флюоресцентный краситель) | Окрашенные - гетерохроматин; неокрашенные - эухроматин | Выявление численных и структурных аномалий хромосом |
Метод R (реверс) | Giemsa или флюоресцентный краситель | Окрашенные - эухроматин; неокрашенные - гетерохроматин | Выявление численных и структурных аномалий хромосом |
Метод C | Giemsa или флюоресцентный краситель | Окрашенные центромерный гетерохроматин | Анализ полиморфизма хромосом |
Метод Т | Giemsa или флюоресцентный краситель | окрашенные - теломерный гетерохроматин | Анализ полиморфизма хромосом |