МЕТОД ПЕРФУЗИИ ИЗОЛИРОВАННЫХ ОРГАНОВ

МЕТОД МЕЧЕНЫХ АТОМОВ

МЕТОД ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОГО ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ

МЕТОД ДВОЙНЫХ ОБРАТНЫХ ВЕЛИЧИН

ХРОМАТОГРАФИЯ ПО СРОДСТВУ

ИОННООБМЕННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

В зависимости от ряда разделимых белков используют неуходящую или обменную смолу, с функциональными группами которой обменивается часть белков и задерживается на ионах, в то время как другие беспрепятственно вытесняются из колонии.

Основана на принципе избирательного взаимодействия белков (или других макромолекул) с лигандами, закреплёнными на носителе. Достоинство этого метода в том, что он позволяет выделить заданный белок с высокой степенью чистоты.

ГЕЛЬ – ФИЛЬТРАЦИЯ

При обработке декстрана эпихлорэнгидридом образуются гидрофильные зёрна (сефадексы). Благодаря большому сродству к воде, они сильно набухают, образуя гель. Зёрна сефадекса в этом состоянии непроницаемы для веществ с большой М, в то время как небольшие молекулы легко дифундируют.

Если существует равенство между двумя какими-либо величинами, то и обратные величины тоже будут равны. Этот метод применяется в энзимологии.

Для этого сначала разрушают клеточную структуру с помощью дезинтегратора и полученную гомогенную массу подвергают дифференциальному центрифугированию.

При этом выделяют несколько фракций:

1. при низкой скорости - фракция ядер

2. при средней скорости - фракция митохондрий

3. при высокой скорости - фракция рибосом

4. оставшаяся жидкость - фракция цитоплазмы

С помощью этого метода была установлена внутриклеточная локализация ферментов.

Обычно используются либо стабильные изотопы элементов, которые отличаются по массе от элементов организма, либо радиоактивные изотопы.

Пометив при помощи стабильного или радиоактивного изотопов молекулу исследуемого соединения введя его в организм определяют затем меченые атомы и сканируют их в определенных соединениях, делают заключение путем превращения меченого вещества в организме. С помощью этого метода мож – но определить время пребывания вещества в организме по времени полураспада радиоактивного про – тона. Изотопы применяются так, чтобы установить, является ли данное вещество или продуктом ра – спада другого соединения. Например, при существовании нескольких путей обмена веществ можно оп –

ределить, какой из них преобладает.

При удалении органов имеется два объекта исследования: доступные органы и изолированный орган. В частности путем изучения перфузанта в опытах с изолированными органами было установлено, что печень служит главным местом образования кетоновых тел и мочевины.