Окраска фиксированных препаратов микроорганизмов простым методом

Приготовление препаратов фиксированных клеток

Фиксированными считают клетки микроорганизмов, в которых прерваны жизненные процессы, но полностью сохранена тонкая структура. Для получения фиксированных препаратов важно правильно подготовить предметные стекла. Они должны быть чистыми и тщательно обезжиренными. Для этого стекла, бывшие в употреблении, выдерживают 1-2 часа в хромовой смеси (в 1 л воды вносят 50 г бихромата калия и 100 г технической серной кислоты), после чего ополаскивают теплой водой и спиртом. Можно также кипятить стекла в течение 15 мин. в растворе соды или мыльной воды. Для проверки чистоты стекла на его поверхность наносят каплю воды. При достаточном обезжиривании капля растекается равномерно и не собирается в выпуклые, медленно высыхающие пузырьки. Берут стекла пинцетом или аккуратно за грани, так как пальцы оставляют на поверхности жирные пятна.

Приготовление фиксированных препаратов ведут в следующей последовательности:

1. На середину чистого обезжиренного предметного стекла стерильной петлей наносят небольшую каплю воды. В нее вносят исследуемый материал, отобранный по методике, описанной в разделе 1. Полученную суспензию равномерно распределяют по поверхности стекла тонким слоем таким образом, чтобы препарат распределился на площади примерно 2-3 см2.

2. Полученный мазок высушивают при комнатной температуре на воздухе.

3. Производят фиксацию мазка. Для этого стекло с высохшим мазком проводят 3-4 раза над пламенем горелки той стороной, где мазок отсутствует.

Цель фиксации:

· умертвить клетки микроорганизмов и сделать их безопасными (что особенно важно при работе с патогенными микроорганизмами);

· зафиксировать (закрепить) мазок на стекле (чтобы они не смывались при окрашивании);

· улучшить окрашивание, поскольку мертвые клетки лучше адсорбируют на своей поверхности различные красители.

Приготовление фиксированных препаратов из естественных мест обитания микроорганизмов проводится так же, как и из чистых культур. Помимо термической обработки, применяют также фиксацию химическими веществами: погружают предметное стекло с мазком в мензурку с 96 %-ным этанолом на 15-20 мин, с ацетоном на 5 мин, со смесью 96 % -ного этанола и 40%-ного формалина (соотношение 95:5) на 2 мин. и др.

Фиксированные препараты нельзя рассмотреть под микроскопом, так как они являются бесцветными и пропускают световые лучи. Поэтому их окрашивают, используя простые или сложные методы. При окрашивании фиксированных мазков простыми методами используют один краситель (фуксин, краска Муромцева, генцианвиолет, метиленовая синь и др.). Последовательность окрашивания мазка простыми методами следующая:

1. На фиксированный препарат наносят несколько капель красителя таким образом, чтобы он покрывал всю поверхность мазка и выдерживают в течение определенного времени. Так, при окраске фуксином на мазок наносят несколько капель красителя и выдерживают его на мазке 2-3 мин.

2. Краску смывают с мазка слабой струей до бесцветной смывной воды. При этом стекло держат в наклонном положении над лотком.

3. Мазок подсушивают фильтровальной бумагой, которую осторожно прикладывают к стеклу, и досушивают на воздухе.

4. На окрашенный мазок наносят каплю иммерсионного масла и рассматривают препарат с объективом х90 или х100.

Задание 3. Схематически изобразить морфологическую структуру бактериальной клетки:

Задание 4. По памяти зарисовать и подписать основные шаровидные формы бактерий (микрококки, диплококки, тетракокки, сарцины, стрептококки, стафилококки).

Задание 5. По памяти зарисовать и подписать основные палочковидные формы бактерий.


Приложение к лабораторной работе №1

Задание 6.Зарисовать и подписать расположение жгутиков у бактерий (монотрихи, лофотрихи, амфитрихи, перитрихи).

  Монотрихи– бактерии с 1 полярно расположенным жгути­ком
  Лофотрихи– бактерии, на одном конце которых имеется пучок жгутиков
  Амфитрихи– бактерии, имеющие пучки жгутиков на обоих полюсах бактериальной клетки
  Перитрихи– бактерии, жгутики которых расположены по всей поверхности бактериальной клетки, то есть перитрихеально

Приложение к лабораторной работе №1

Задание 7.Зарисовать и подписать виды расположения спор в теле микроорганизма.

 

  Терминальное расположение спор. Спора располоагается на полюсе бактерии, и тогда она приобретает форму барабанной палочки.  
  Центральное расположение спор. Если споры крупные и располагаются в центре клетки, то палочка может приобретать веретенообразную форму
  Субтерминальное расположение спор. Спора располагается на конце палочки, и тогда она приобретает форму булавы.

 

 

Лабораторная работа №3-4

Тема: Морфологические признаки дрожЖей и микроскопических грибов. влияние окружающей среды на микроорганизмы. Стерилизация и дезинфекция.

Цель: Изучить основные признаки дрожжей и микроскопических грибов. Приготовление живых препаратов дрожжей и грибов. Ознакомиться с влиянием окружающей среды на микроорганизмы, изучить методы и способы стерилизации и дезинфекции.

Оборудование, материалы: Микроскоп; термостат; сухожаровый шкаф; препаровальные иглы и бактериологические петли; предметные и покровные стекла; фильтровальная бумага; спиртовка; лоток с рельсами для предметных стекол; разделочные доски, лопатки, обработанные с применением растворов хлорсодержащих препаратов; раствор йодисто-калиевого крахмала; метиленовая синь, пипетки; культуры грибов родов Mucor, Aspergillus, Penicillium, Alternaria; чистая культура дрожжей Saccharomyces cerevisiae.

 

ХОД ЗАНЯТИЯ: