Курсовая работа: Паразитологическое состояние лесных биотопов рекреационной зоны города Гомеля

Гомельская научно-практическая конференция учащихся

по естественно-научным направлениям «Поиск»

Государственное учреждение образования

«Средняя общеобразовательная школа № 43 г. Гомеля»

«Паразитологическое состояние лесных биотопов

рекреационной зоны города Гомеля»

Учащегося 8 «Б» класса Государственного учреждения образования «Средняя общеобразовательная школа № 43 г. Гомеля»

Лазаренко Дмитрия Игоревича

Руководитель – учитель биологии высшей категории Государственного учреждения образования «Средняя общеобразовательная школа № 43 г. Гомеля»

Дубков Сергей Григорьевич

Научный консультант – старший преподаватель кафедры зоологии и охраны природы УО «Гомельский Государственный Университет имени Ф. Скорины»

Кураченко Ирина Витальевна

Гомель , 2010 г.

Оглавление

Введение

Основная часть

Глава 1. Обзор литературы

Глава 2. Место и методы исследований

Глава 3. Результаты исследований

Заключение

Список литературы

Приложения

Приложение 1. Лист для опроса населения о контакте с иксодовыми клещами

Приложение 2. Динамика заболеваемости Лайм-боррелиозом по городу Гомелю и Гомельской области

Приложение 3. Заболеваемость трансмиссивными инфекциями в Гомельской области в 2009 году в разрезе районов

Приложение 4. Инструкция по применению набора иммунофлюоресцентного для выявления возбудителя болезни Лайма в переносчиках

Приложение 5. Инструкция по профилактике заболеваний весенне-летним энцефалитом и болезнью Лайма  (Памятка населению)

Введение

Актуальность проблемы. Изучение иксодовых клещей как переносчиков и хранителей возбудителей трансмиссивных болезней с природной очаговостью – важная проблема, требующая срочного решения. По этому поводу в нашей республике проводятся многочисленные научные исследования по изучению видового состава, биологии и экологии иксодовых клещей, а также по изучению круга их хозяев. Все исследователи в этой области в своей работе опираются на теорию природной очаговости академика Е.Н. Павловского. Согласно этому учению в природе имеются очаги инфекции, где происходит циркуляция возбудителей заболевания между эктопаразитами и их хозяевами [1].

Весьма велико значение клещей как специфических переносчиков возбудителей различных инфекционных болезней человека, домашних и диких животных. Многие свободноживущие клещи являются промежуточными хозяевами паразитических червей домашних животных. Непосредственно в Беларуси отмечено заболевание овец и человека шотландским энцефалитом, заболевание человека клещевым весенне-летним энцефалитом, сезонным вирусным менинго-энцефалитом, туляремией, передаваемых Ixodes ricinus L. [1,2,3]. В последние годы динамика по заболеваемости клещевым энцефалитом по городу Гомелю и Гомельской области снижается, зато по Лайм-боррелиозу – плавно растёт (приложения 2,3). По данным ГОСЭС процент бактериофности клещей за 2009 год составил 8,7% (снятых с людей) и 3,1% (собранных в природе).

Поэтому важным разделом акарологических исследований является определение численности клещей и сезонных её изменений применительно к видам, имеющим эпидемиологическое и эпизоотическое значение.

Нами была выдвинута гипотеза об опасности клещей, нападающих на человека в зоне отдыха пригорода Гомеля.

Учитывая все аспекты важности изучения биологии иксодовых клещей, были проведены следующие исследования.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы было: изучение видового состава кровососущих клещей семейства Ixodidae лесных биотопов рекреационной зоны города Гомеля, стациального распределения и сезонной динамики численности клещей, а также выяснение их роли в распространении паразитологических заболеваний, опасных для человека.

При этом решались следующие задачи:

ü   знакомство с литературой об иксодовых клещах и их роли в распространении клещевого боррелиоза (болезни Лайма) и весенне-летнего энцефалита;

ü   применение на практике энтомологических методов исследования и сбора фауны членистоногих в полевых условиях;

ü   приобретение навыков определения собранного материала, знакомство с сотрудниками научно-исследовательских лабораторий по изучению беспозвоночных животных;

ü   формирование экологического мировоззрения и санитарно гигиенических навыков сохранения своего здоровья.

Теоретическая ценность работы. Проведенные исследования пополняют сведения о видовом составе и особенностях стациального распределения клещей семейства Ixodidae, о паразитологической ситуации в лесных биотопах рекреационной зоны города Гомеля.

Практическое значение. Приведенные в работе данные (впервые для территории города Гомеля) описывают распределение по биотопам и активность нападения клещей в пригородных лесах окрестностей Гомеля, что имеет значение для создания прогноза инфекций, передаваемых иксодовыми клещами, и могут быть использованы для организации профилактики заражений в местах большого скопления отдыхающих и грибников.

Выяснение биологии иксодовых клещей является составной частью программы, осуществляемой кафедрой зоологии и охраны природы Гомельского Государственного Университета имени Ф. Скорины по изучению фауны беспозвоночных животных Гомельской области.

Выражаем глубокую благодарность:

·  Ведущему энтомологу Гомельской Областной Санитарно-эпидемиологической Станции (ГОСЭС) Наталье Михайловне Кожемякиной;

·  Лаборанту-энтомологу ГОСЭС Виктории Евгеньевне Приходько;

·  Работникам Макеевского лесничества Гомельского ЛХПО за предоставленную помощь и сотрудничество.

Глава 1. Обзор литературы

Изучение природноочаговых инфекций, их переносчиков и структуры очагов начато экспедициями под руководством М.П. Чумакова в 1940 году. Хотя первые сведения об иксодовых клешах – переносчиках паразитарных заболеваний животных мы находим в работе В.Л. Якимова [3,4].

За это время достаточно хорошо изучили биологию и экологию двух видов иксодовых клещей: Ixodes ricinus Linnaeus, 1758 и Dermocentor pictus Hermann, 1804 (приоритетное название Dermocentor reticulatus Fabrcius, 1794) как наиболее распространённых, повсеместно встречающихся и многочисленных в Беларуси из 14 видов зарегистрированных клещей. Результаты исследований белорусских паразитологов показывают, что клещи вида Ixodes ricinus L. составляют 96-99,6% от общей массы собранных клещей и способны нападать на домашних, диких животных и человека [3,5].

Цикл развития иксодид включает яйцо и три активные морфологические фазы, разделённые линьками: личинку, нимфу, половозрелую. Каждая из активных фаз – облигатный временный кровосос, питающийся только один раз в жизни. В течение стадии питания клещ сосёт кровь, безотрывно находясь на теле хозяина в течение нескольких дней. Для личинок период питания равен 2-4 дням, для нимф – 4-6 суток, а сам и пьют кровь пять – десять, иногда пятнадцать суток [6].

Цикл развития для разных видов различны: для вида Ixodes ricinus – от 2-3 до 5-6 лет, для вида Dermocentor pictus – однолетний цикл развития. Для видов клещей с многолетним циклом развития характерны диапаузы личинок и нимф, питаюшихся во второй половине лета и осенью. У таких видов за сезон может развиться лишь одна фаза, редко – две. Клещи очень плодовиты. Самки откладывают от 2000 до 20000 яиц. Колебания численности клещей от года к году вызываются изменениями микроклимата мест обитания, погодой в сезон развития, величиной смертности от врагов и болезней, колебаниями численности животных-хозяев [7].

С иксодовыми клещами Ixodes ricinus и Dermocentor pictus связаны возбудители заболеваний человека вирусной и боррелиозной природы ( западный клещевой энцефалит и клещевой боррелиоз Лайма). И, если первое заболевание в Беларуси распространяется клещём Ixodes ricinus, то возбудители Лайм-боррелиоза выделялись обоих видов клещей и обнаруживались антигены этих патогенов [3]. Эти факты необходимо учитывать при проведении противоклещевых мероприятий и оценке их значимости для здравоохранения и ветеринарной медицины.

Сезонная динамика численности иксодовых клещей

Выяснено, что сезонная динамика численности и паразитирования клещей на животных и человека в разные годы и в зависимости от естественных географических и экологических условий различна. Обычно личинки и нимфы Ixodes ricinus активны весь сезон (начиная с марта месяца) с максимумом в мае – июне и в большинстве районов повторно в конце лета осенью (август – сентябрь). Исследования показывают, что нападения взрослых клещей Ixodes ricinus на крупный рогатый скот и человека (в центральном округе республики) наблюдается с ранней весны (конец апреля) до конца ноября. При этом динамика численности взрослых клещей может быть представлена в виде двухвершинных кривых с максимумом весной в мае (более высокий) и осенью (более низкий) в августе-сентябре [7,8].

По другим данным максимальный подъём численности Ixodes ricinus приходится на май и на последнюю декаду июня или на июль месяц [2,9,10].

Заклещевение животных широко варьирует в силу того, что количество клещей, нападающих на животных, тесно связано с температурой, поэтому степень заклещевения животных в то или другое время служит скорее индексом состояния погоды, чем показателя истинной плотности клещей на данном пастбище.

Савицкий Б.П. [11] считает, что в зависимости от характера пастбищ, степени их заклещевения и климатических условий сезонное заклещевение может перемещаться или иметь одновершинную кривую с максимумом в июне – июле. Но даже в период своей минимальной активности этот вид встречается в довольно большом количестве.

Dermocentor pictus имеет пики активности в мае и во второй и третьей декадах октября, но при раннем потеплении клещей Dermocentor pictus можно обнаружить в апреле и даже в середине марта [2,11].

Работами белорусских паразитологов установлено, что паразитирование личинок и нимф клещей Ixodes ricinus в центральном районе республики на диких млекопитающих обычно длится с мая до середины сентября с максимальным повышением в июле. На ящерицах максимальное количество личинок отмечено в мае, нимф – в августе; на птицах, соответственно, в июле и в августе. Обнаружение преимагинальных и имагинальной стадий клещей на животных совпадает с их сезонной активностью в природе. Количество взрослых клещей на ежах даёт две волны весеннюю и осеннюю; наибольшее количество личинок и нимф приходится на середину лета. Взрослых клещей находили на домашних животных в мае, конце августа, в сентябре, октябре. На диких животных – в мае, сентябре и редко в июне – июле. Нимф находили в мае, июне, июле, августе и начале сентября. Таким образом, основная масса заклещевения приходится на май, июнь-август и начало сентября.

Исследования, которые были проведены в очагах сезонного менингоэнцефалита в Беларуси показали, что в природе, в местах выпаса скота, в мае и июне встречались в большом количестве голодные половозрелые особи (57,7%), а в июле – только нимфы. Минимальное количество клещей наблюдалось во второй декаде августа, а последние клещи – в третьей декаде ноября.

Стациальное распределение иксодовых клещей

Крупные исследования по изучению стациального распределения клещей семейства Ixodidae в различных растительных ассоциациях на территории Беларуси проводили в разные годы И.Т. Арзамасов и его коллеги и многие другие учёные – паразитологи. В результате этих работ были выявлены основные закономерности распространения иксодовых клещей и в особенности видов Ixodes ricinus и Dermocentor pictus, которые являются преобладающими на всей территории республики. При обследовании наиболее характерных для республики растительных формаций оказалось, что иксодовые клещи встречаются в свойственных для каждого вида растительных стациях с хорошим увлажнением и достаточной сомкнутостью крон [3].

В области европейских широколиственных лесов (южная и юго-восточная части республики) местами наибольшей численности клещей являются дубовые и дубово-грабовые ассоциации, чёрноольшаники, ельники черничниковые и елово-широколиственные леса. В зоне этих лесов повсеместно распространены Ixodes ricinus и Dermocentor pictus.В центральной части – в елово-широколиственных лесах и на севере – в ельниках лещиновых, сероольшаниках и ельниках черничниковых – численность клещей также велика.

Наблюдения над стациальным распределением клеща Ixodes ricinus показали, что в очагах клещевого энцефалита, расположенных в области елово-широко-лиственных лесов (центральная часть Беларуси), местами наибольшей концентрации клещей являются низменные участки (лощины). Меньше заражены клещами участки ольсового мелколесья со слаборазвитым травяным покровом и просеки шириной не более 10 метров. Ещё меньше заклещевлёнными оказались сосновый бор – черничник, верещатник, высокоствольные сосново-лиственные леса, участки берёзового мелколесья, просеки шириной свыше 10 метров. Свободными от Ixodes ricinus оказались участки соснового мелколесья, сильно изреженные сосновые леса, вырубки, болота.

Широко распространённым на пойменных лугах с хорошо развитой травяной и кустарниковой растительностью является Dermocentor pictus. Единичные находки данного вида отмечены в сосняках, ельниках, березняках, дубово-грабовых лесах, смешанных молодняках. Он иногда встречается в широколиственных хвойных лесах и на целинных участках, заросших бурьяном и кустарником. На открытых и чистых от кустарников заливных лугах, а также на лесных полянах, клещи вида Dermocentor pictus почти не встречаются.

Сосновые леса

И.Т. Арзамасов [5] считает, что сосновые леса незначительно заселены иксодовыми клещами: I. ricinus и D. pictus, которые периодически заносятся туда животными из открытых биотопов. Незначительная плотность заселения сосняков мелкими млекопитающими, более низкая относительная влажность по сравнению с другими типами леса, бедность подстилки и редкий травяной покров способствуют ухудшению условий для развития клещей.

Б.П. Савицкий не обнаружил клещей в сухих сосняках – черничниках, сосняках сфагновых и сфагново-черничных в очагах клещевого энцефалита.

Субори

Интенсивность заражения клещами стаций сосново-еловых лесов выше, чем боров. Заклещевение в суборях в два и более раз больше, чем в сосняках. Вследствие более разнообразного флористического и фаунистического состава сосново-еловый лес является более благоприятной стацией обитания I. ricinus, чем сосняки. Редко встречаются D. pictus [1,5].

Еловые леса

Исследования, проведённые в ГЗОХ "Беловежская пуща" показали, что интенсивность заражения, относительный запас клещей и данные учётов с растительности выше в два раза по сравнению с предыдущими стациями. В еловых лесах мощная подстилка, густой травяной и кустарниковый покров, выше численность мелких млекопитающих.

В еловых и елово-широколиственных лесах встречаются в значительном количестве клещи I. ricinus (доминанта), реже – D. pictus.

Дубовые леса

В различных разновидностях дубрав преобладающим видом является I. ricinus. Редко встречаются D. pictus.

Ольховые леса

В ольшаниках очень часто встречаются виды I. ricinus (массовый вид) и единично – D. pictus, хотя в некоторых стациях (черноольшаник крапивный) I. ricinus является субдоминанта. Широколиственные породы и черноольшаники создают сомкнутую крону, под которую редко проникают солнечные лучи, а густой подлесок и толстая подстилка способствуют поддержанию более постоянной температуры и повышений влажности. Всё это создаёт благоприятные условия для успешного развития I. ricinus [8].

Березовые леса

Относительный запас I. ricinus в берёзовом лесу значительно меньше, чем в ольшаниках. По степени заражённости клещами березняки можно приравнивать к сосновым лесам. Здесь встречаются часто I. ricinus, редко – D. pictus. Большая заселённость клещами лиственных и хвойно-широколист-венных лесов является следствием их достаточной влажности, оптимальной температуры, благоприятного растительного покрова, богатой подстилки и большой плотности заселения хозяевами клещей [1,5].

Хозяева клещей

Возникновение очагов массового размножения клещей связывают с фактором питания. Для иксодовых клещей свойственен широкий круг хозяев. Известно, что I. ricinus паразитирует в Беларуси на 35 видах позвоночных животных [1,5,13]. Хозяевами этого вида могут быть практически все наземные млекопитающие, многие птицы, пресмыкающиеся, населяющие соответственные биотопы.

Исследования И.Т. Арзамасова показали, что главными хозяевами для взрослых клещей I. ricinus из домашних животных оказались крупный рогатый скот, собака; из диких – благородный олень, лисица, заяц-русак, а локально для Беловежской пущи и зубр. К второстепенным хозяевам можно отнести лошадь, овцу, кошку, ежа. Из мелких млекопитающих взрослые клещи встречались на белках и лесной соне, мышевидных грызунах и насекомоядных. Главными хозяевами нимф можно считать обыкновенную белку и обыкновенного ежа. Меньшую роль в прокормлении нимф играют благородный олень, заяц-русак, черный дрозд, соня-полчок, мышь-малютка, рябчик, лесной конёк, ящерица прыткая, лесная соня, желтогорлая мышь, сойка, рыжая полёвка, бурозубки. Как и нимфы, личинки наиболее часто паразитируют на ежах и белках. На крупных млекопитающих личинки встречаются чрезвычайно редко. К основным хозяевам личинок I. ricinus относятся также европейская рыжая полёвка и желтогорлая мышь, лесная рыжая полёвка, которые являются фоновыми видами в лесных формациях. В силу своей многочисленности именно эти два вида мышевидных грызунов, обитающих почти во всех стациях, могут иметь не меньшее значение в прокормлении личинок, чем, например, менее многочисленные белки и ежи. Исследователи акарофауны Беларуси относят желтогорлую мышь, водяную полёвку, лесную мышь, обыкновенную белку к основным хозяевам преимагинальных фаз клещей [1,5].

Главными хозяевами преимагинальных фаз D. pictus являются мелкие грызуны (водяная, обыкновенная и европейская рыжие полёвки) и обыкновенный ёж. К второстепенным хозяевам можно отвести малую бурозубку, полевую мышь, желтогорлую мышь, крота, лесную соню, обыкновенную белку, зайца, собаку, домашних и диких копытных.

I. ricinus паразитируют преимущественно на животных, обитающих в лесных стациях. Наоборот, D. pictus чаще всего встречается на млекопитающих, живущих в открытых местах. Дикие позвоночные, придерживающиеся поселений человека и культурных полей, клещами не заражены. Птицы, связанные по образу жизни с травяным покровом, то есть, когда возможен непосредственный контакт клещей с их хозяевами, часто заражены клещами I. ricinus [5].

Подводя итог, можно сказать, что клещи чаще всего встречаются на таких животных, которые ведут экологически сходный с ними образ жизни. Иксодовые клещи в природе встречаются все теплое время года. С наступлением теплых весенних дней голодные клещи выбираются из зимних убежищ и начинают нападать на человека и животных. На зимовку они уходят поздней осенью. Пик нападения на людей и животных приходится на весну – начало лета. В более южных регионах это происходит ещё и осенью.

Ниже (таблица1) приводятся литературные сведения по нападению на человека клещей Ixodes ricinus L.

Таблица 1 – Возрастной состав и степень насыщения клещей Ixodes ricinus L., снятых с людей в Белоруссии (1956-1983 гг.)

Примечание: самцы, находившиеся в стадии копуляции, при расчёте не учитывались.

Глава 2. Место и методы исследований

Сбор клещей с растительности проводился по методике, разработанной школой академика Е.H.Павловского при помощи флага из фланелевой ткани размером 60 х 100 см. Материя прикрепляется к палке длиной 100 – 150см. Флагом, не допуская скручивания, приглаживают растительный покров на исследуемом участке или протаскивают его по почве [3,16]. Флаг протаскивается по растительному покрову в течение одного часа, клещей с флага снимают пинцетами и фиксируют в 70-градусном спирте (приложение 6). Для каждой повторности (всего четыре повторности) заготавливается этикетка с подробными указаниями места, времени, даты сбора, которая опускается в пробирку с клещами, собранными в течение данной повторности. Фиксированный материал определялся самостоятельно по Определителю под редакцией профессора П.А. Чирова [17]. Правильность определения подтверждала Кураченко Ирина Витальевна, которая курировала данный проект.

Рисунок 1 – План-схема лесных кварталов, где проводились исследования

Сбор клещей и опрос встреченных в лесу отдыхающих и грибников проводился в 2009-2010 годах в рекреационной зоне города Гомеля (лесные формации между Гомельским радиозаводом и микрорайоном «Медгородок» Макеевского государственного лесничества), где отмечаются многочисленные места отдыха городского населения, сбора грибов и ягод, берёзового сока (рисунок 1).

 Опрос населения о контакте с иксодовыми клещами проводился старшеклассниками школы по инструкции и анкете, разработанной Б.П.Савицким, Е.Е. Падутовым и Л.С. Цвирко [15] (приложение 1). Всем встреченным в лесу отдыхающим показывали рисунки клещей I. ricinus (рисунок 2).

Рисунок 2 – Голодная самка, самец и напитавшаяся самка I. ricinus

Учащиеся одиннадцатых классов, изучавшие факультативный курс «Дикая природа Беларуси», принимали также непосредственное участие в сборе иксодовых клещей.

Часть нефиксированных в спирту клещей (живых или мёртвых) отвозилась в энтомологическую лабораторию Гомельской Областной Санитарно-эпидемио-логической Станции (ГОСЭС), где по договорённости с ведущим её энтомологом Кожемякиной Натальей Михайловной осуществлялось выявление возбудителя болезни Лайма в переносчиках. К сожалению, нам не разрешили присутствовать при лабораторных исследованиях и довольствоваться оставалось только Инструкцией (приложение 4).

Выборка клещей для выявления возбудителя Лайм-боррелиоза проводилась случайно без учёта собранного количества и видового состава клещей по исследованным биотопам.

Глава 3. Результаты исследований

За 2009 год с апреля по октябрь месяц проведёно 75 флаго-часов учётов иксодовых клещей, в результате которых собрано 1513 экземпляров, относящихся к двум видам. Учёт проводился один раз с четырёхкратной повторностью в каждую декаду месяца с апреля по октябрь включительно. В таблице 2 отражены результаты наших сборов.

Таблица 2 – Соотношение фаз клещей по видам в сборах 2009 года

Первые семь клещей были собраны вручную с растительности ещё 29 марта 2009 года (3 самца и три самки D. pictus и самка I. ricinus). Последние два клеща (D. pictus) были пойманы 2 ноября 2009 года. Таким образом, активность иксодовых клещей проявляется в течение всего тёплого периода года – с конца марта до первых чисел ноября месяца.

За время проведения исследований было опрошено 123 человека, встреченных в лесу, на предмет нападения клещей. Большинство отдыхающих не были подвержены укусам клещей, но 73% респондентов встречались с ними в лесу или снимали ползающих клещей с тела и одежды. Многочисленные нападения клещей отмечались поздней весной и в начале лета. По предъявляемым рисункам было ясно, что чаще всего на людей нападают самки Ixodes ricinus.

Таблица 3 – Сроки появления активных стадий клещей (в рекреационной зоне города Гомеля)

Для сравнения активности клещей по месяцам был введён средний учётный индекс обилия, которой рассчитывался как среднее за один учёт количество клещей, приходящееся на один флаго-час, то есть на одну повторность (1 учёт включает 4 повторности по 1 часу).

Количество клещей на один флаго-час колебалось в среднем от 0,5 до 40,3 экземпляра. Больше всего клещей собрано во второй и третьей декадах мая, меньше всего – во второй половине июня. На диаграмме 1 и в таблице 4 хорошо видна динамика численности иксодовых клещей по декадам месяцев 2009 года.

По результатам наших сборов на диаграмме отмечается двухвершинная кривая с максимумами в середине мая (более высокий) и в середине сентября (более низкий). Отмечена высокая численность клещей и в апреле месяце.

Таблица 4 – Динамика численности иксодовых клещей по декадам месяцев 2009 года

Диаграмма 1 – Динамика численности иксодовых клещей по декадам месяцев 2009 года

В пригородных лесах, где нет выпаса скота, количество других прокормителей имаго невелико. Здесь вычерпывание имаго проходит менее интенсивно, чем личинок и нимф, что и определяет растянутость периода активности практически до осенних заморозков. Однако нельзя исключать и тот факт, что часть нимф и особенно личинок при учётах остаются незамеченными из-за мелких размеров.

В мае – июне месяце 2010 года были проведены учёты клещей в разных биотопах леса с целью выяснения степени их заклещевлённости.

Из таблицы 5 видно, что наибольшее суммарное количество иксодовых клещей собрано в березняке кисличном – 276 экземпляров, меньше всего – в сосняке орляковом – 47 экземпляров. Остальные стации по количеству собранных клещей занимают промежуточное положение. Однако только по одним этим данным судить о заклещевлённости биотопов будет неверно, так как количество проведенных учётов небольшое, а учётная площадь в каждой стации была разной.

Таблица 5 – Сравнение лесных биотопов по степени заклещевлённости

Из таблицы 5 видно, что наиболее заклещевлёнными являются березняк черничный и сосняк кисличный – растительные ассоциации с наиболее высокими средне-учётными индексами обилия (соответственно – 34,5 и 27,1 экземпляров на 1 флаго-час).

Эти биотопы обладают благоприятными условиями для развития иксодовых клещей и достаточно часто посещаемы людьми для отдыха и сбора берёзового сока и грибов (по результатам анкетирования).

Стацией со средней заклещевлённостью оказался сосняк мшистый, средне-учётный индекс обилия которого равен 113 экземпляров на один флаго-час.

 Степень заклещевения сосняка орлякового оказалась наименьшей из всех стаций (средне-учётный индекс обилия равен 47 экземпляров клещей на один флаго-час).

Условия для развития клещей лучше там, где мощная подстилка, густой травяной и кустарниковый покров, выше численность мелких млекопитающих.

В энтомологической лаборатории смогли протестировать 187 клещей из наших сборов и определить возбудителя Лайм-боррелиоза в трёх клещах Dermocentor pictus, что составляет 1,6%. По данным ГОСЭС этот показатель по Гомельской области составляет около 2%.

Заключение

Полученные материалы имеет важное медико-паразитологическое значение, особенно для пригородных зон крупных промышленных городов, где угодья активно используются в рекреационных целях и для сбора грибов, ягод, берёзового сока. Эти данные необходимы для составления прогнозов численности клещей и определения рациональных календарных сроков мероприятий по борьбе с ними.

1. В результате проведенных исследований собрано 1513 экземпляров клещей, относящихся в видам Ixodes ricinus Linnaeus, 1758 и Dermocentor pictus Hermann, 1804 (приоритетное название Dermocentor reticulatus Fabrcius).

2. При сборах с растительности на флаг доминирующим видом среди иксодовых клещей в различных биотопах рекреационной зоны города Гомеля отмечен D. pictus – 1075 экземпляров (71%), I. ricinus составляет 29% (438 экземпляров), хотя по литературным данным в лесных биотопах преобладает I. ricinus.

3. Наши исследования показали, что взрослые клещи и их преиммагинальные стадии активны с ранней весны (конец марта) до начала ноября. При этом их динамика численности представлена в виде двухвершинной кривой с максимумом весной в мае (более высокий) и осенью (более низкий) в сентябре.

4. Возбудители Лайм-боррелиоза при лабораторных анализах были обнаружены в трёх клещах, что доказывает опасность встреч человека и с Ixodes ricinus, и с Dermocentor pictus.

5. Наиболее заклещевлёнными являются березняк черничный и сосняк кисличный (средне-учётный индекс обилия соответственно равен 34,5 и 27,1 экземпляров клещей на один флаго-час). Стацией со средней заклещевлённостью является сосняк мшистый (средне-учётный индекс обилия равен 14,1). Наименее заклещевлённым является сосняк орляковый, в котором учётный индекс обилия равен 5,9 экземпляра клещей на один флаго-час.

6. По материалам исследований мы подготовили соответствующую инструкцию по профилактике заболеваний весенне-летним энцефалитом и болезнью Лайма (приложение 5).

7. Результаты исследований были доведены до сведения работников Макеевского лесничества Гомельского лесхоза Гомельского ЛХПО (лесохозяйственного производственного объединения). Были проведены соответствующие санитарно-технические мероприятия по борьбе с иксодовыми клещами, установлены предупреждающие щиты.

В перспективе планируется организация сотрудничества с Гомельской городской СЭС по изучению паразитологического состояния лесопарковой зоны окрестностей города Гомеля с целью мониторинга активности нападения клещей и профилактики заражений клещевым энцефалитом и Лайм-боррелиозом.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Арзамасов, И.Т. Стациальное распределение и круг хозяев клеща I. ricinus в условиях БССР / И.Т. Арзамасов //Сб. тезисов докладов научно-практической конференции по заболеваниям с природной очаговостью. Бел. ИЭМГ. – Минск, – 1957. – С. 17-19.

2. Вапник, Е.Е. Распространение иксодовых клещей и заболеваний с природной очаговостью на территории БССР Е.Е. Вапник, Б.П. Савицкий, Х.М. Модель Сб. тезисов докладов научно-практической конференции по заболеваниям с природной очаговостью. – Минск: Бел. ИЭМГ, 1957. – С.29 31.

3. Савицкий, Б.П. Пастбищные виды иксодовых клещей в Беларуси и итоги изучения их роли в патологии человека и домашних животных / Б.П. Савицкий, Г.А. Ефремова, Л.И. Карпук // Экология и животный мир. ГНУ «Институт зоологии НАН Беларуси». – Минск, 2008. – №1. – С.11-22.

4. Савицкий, Б.П. Итоги изучения кровососущих членистоногих, имеющих медицинское значение на территории Беловежской пущи (БССР) / Б.П. Савицкий // Вести АН БССР, 1980. – Вып. 5. – С. 113-114.

5. Арзамасов, И.Т. Иксодовые клещи / И.Т. Арзамасов. – Минск: Изд. АН

БССР, 1961. – 132с.

6. Арзамасов, И.Т. Видовой состав и распространение иксодовых клещей в Бело-руссии / И.Т. Арзамасов. – Вести АН БССР, сер. биол. наук, 1957. – № 1. – С.9-11.

7. Филлипова, Н.А. Иксодовые клещи подсемейства Ixodinae. Фауна СССР. Паукообразные / Н.А. Филлипова. – 1977. – Т.4. – В.4. – 396 с.

8. Адамович, В.Л. Ландшафтно-географическое размещение иксодовых клещей в Волынском Полесье / В.Л. Адамович. – Зоологический журнал, 1961. – № 40(5). – С. 676 – 685.

9. Мишаева, Н.П. Зоологические особенности иксодовых клещей в очагах клещевого энцефалита различных ландшафтно-географических зон Белоруссии / Н.П. Мишаева, Б.П. Савицкий, В.И. Вотяков // Сб. докладов Первого акарологического совещания. – М-Л., «Наука», 1966. – С. 132-133.

10. Захарченкова, Л.В. Роль диких позвоночных в прокормлении различных фаз развития скотского (I. ricinus L.) и таежного (I. persulcatus Sch.) клещей / Л.В. Захарченкова // Сб. научных работ студентов Карело-Финского Гос. Ун-та, 1954. – Вып. 2. – С. 93-112.

11. Савицкий, Б.П. Пути эволюции зооты клещевого энцефалита под влиянием антропогенных факторов / Б.П. Савицкий // Сб. тезисов ІV зоологической конференции БССР. – Мн., 1976. – С. 251-253.

12. Мишаева, Н.П. Исследование кровососущих членистоногих в очагах клещевого энцефалита Белорусского Полесья / Н.П. Мишаева, Х.М. Модель Сб. тезисов докладов ІІІ зоологической конференции Бел. СССР. – Мн., 1968. С. 270-271.

13. Сердюкова, Г.В. Распределение иксодовых клещей в зональных типах растительности / Г.В. Сердюкова // Сб. тезисов докладов ІХ совещания по паразитологическим проблемам. Зоол. Ин-т АН СССР. – Л., 1955.

14. Арзамасов, И.Т. Зоогеографический анализ кровососущих членисто-ногих насекомоядных и грызунов фауны Белоруссии / И.Т. Арзамасов // Вести АН БССР, серия биологических наук. – Мн., 1973. – № 5. – С.102-105.

15. Савицкий, Б.П. Инструкция для проведения опросов населения о контакте с иксодовыми клещами / Б.П.Савицкий, Е.Е. Падутов, Л.С.Цвирко. – Гомель, ГГУ, 1984. – С. 3-9.

16. Савицкий, Б.П. Опыт изучения иксодовых клещей, нападающих на человека в лесопарковой зоне г. Минска / Б.П. Савицкий, А.В. Хандогий, Л.И. Карпук // Весці БДПУ. – 2007. – №1. – Серыя 3. – С.50-54.

17. Чиров, П.А. Руководство для определения некоторых паразитических членистоногих Нижнего Поволжья / П.А. Чиров. – Изд. Саратовского университета, 1999. – С. 20-31.

Приложение 1

Лист для опроса населения о контакте с иксодовыми клещами

Приложение 2

Динамика заболеваемости Лайм-боррелиозом по городу Гомелю и Гомельской области

Примечание. Информация по 2010 году дана на 01.12.2010 г.

Диаграмма – Динамика заболеваемости Лайм-боррелиозом по г. Гомелю и Гомельской области

Приложение 3

Заболеваемость трансмиссивными инфекциями в Гомельской области в 2009 году в разрезе районов

Приложение 4. Инструкция по применению набора иммунофлюоресцентного для выявления возбудителя болезни Лайма в переносчиках

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

ГУ «НИИ ЭПИДЕМИОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ»

220114, г. Минск, ул. Филимонова, 23, тел. 226-56-75

УТВЕРЖДЕНА МЗ РБ

26 июня 2003 г.

№ гос. рег. МН-7.3519-0204

ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ

набора иммунофлюоресцентного для выявления

возбудителя болезни Лайма в переносчиках

Набор представляет собой комплект, основным компонентом которого является иммунная сыворотка, содержащая антитела к возбудителю болезни Лайма (БЛ).

Основное свойство набора – способность выявлять возбудителя БЛ в переносчиках за счёт специфического взаимодействия антител иммунной сыворотки с антигеном возбудителя. Комплекс антиген-антитело выявляют с помощью антивидовой сыворотки, меченой флюоресцеинизотиоционатом (ФИТЦ), дающей чётко выраженное изумрудно-зелёное свечение микробных клеток возбудителя при люминисцентном микроскопировании. Все компоненты набора являются неинфекционными.

1. НАЗНАЧЕНИЕ

Набор предназначен для выявления антигена – возбудителя БЛ (Borrelia burgdorferi sensu lato) в переносчиках методом, базирующемся на реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ).

Основными переносчиками возбудителя Лайм-боррелиоза являются иксодовые клещи - I. ricinus, реже боррелии обнаруживаются в клещах D. reticulatus. Могут быть исследованы случайные переносчики – другие кровососущие членистоногие приподозрении на вероятность наличия у них возбудителя БЛ.

Исследованию подлежат живые особи любой стадии развития (голодные и напитавшиеся), а также погибшие (без признаков плесени), высохшие переносчики (после их размачивания в цитратно-фосфатном буферном растворе (ЦФБ) при 4-6°С в течение 12-24 часов). Могут быть исследованы фрагменты клеща (часть брюшка).

2. СОСТАВ НАБОРА

2.1. Иммунная сыворотка, готова к использованию, 1,5 мл – 1 пр-ка

2.2. (К+)-антиген возбудит. БЛ, готов к использов., 0,2 мл – 1 пр-ка

2.3. Конъюгат, готов к использованию, 1,5 мл – 1 пр-ка

2.4. Концентрат ЦФБ, 25х, 20 мл – 4 фл.

2.5. Предметные стёкла с лунками, – 3 шт.

2.6. Предметные стёкла без лунок, – 1 шт.

3. ПРИГОТОВЛЕНИ ЦФБ, РАЗЛИВ И ХРАНЕНИЕ КОМПОНЕНТОВ

3.1. Приготовление ЦФБ (цитратно-фосфатного буферного раствора), рН 7,2-7,4: содержимое 1 флакона (п. 2.4.) разводят дистиллированной водой до объёма 500 мл. (Если во флаконе с концентратом ЦФБ образовались кристаллы солей, их предварительно растворяют, помещая флакон в тёплую воду.) проверяют и в случае необходимости коррегируют рН. Применяется для приготовления суспензий из переносчиков, отмывки предметных стёкол. Хранение при 4-6°С до 1 недели.

3.2. Иммунную сыворотку (п.2.1.) разливают на несколько порций из расчёта 10 мкл (0.01 мл) на лунку и хранят до использования при -20°С. Размороженный реагент может храниться при 4-6°С в течение 72 часов.

3.3. К+ (п. 2.2.) разливают порциями по 20 мкл (0.02 мл) и хранят до использования при -20°С. Размороженный реагент может храниться при 4-6°С в течение 72 часов.

3.4. Конъюгат (антивидовые иммуноглобулины, меченые ФИТЦ) с раствором Эванса голубого (п. 2.3.) разливают на несколько порций из расчёта 10 мкл (0,01 мл) на лунку и хранят до использования при -20°С. Размороженный реагент может храниться при 4-6°С 72 часа.

4. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПЕРЕНОСЧИКОВ

4.1. Подготовка к исследованию.

4.1.1. Чистые предметные стёкла с лунками и без лунок ополаскиваются дистиллированной водой и досуха протирают марлевой салфеткой.

4.1.2. Иммунную сыворотку (п.2.1.), К+ (п. 2.2.) и конъюгат (п. 2.3.) размораживают при комнатной температуре. Готовы к применению.

4.1.3. На предметное стекло без лунок наносится капля ЦФБ объёмом 10-20 мкл (0,01- 0,02 мл) в зависимости от размера переносчика. При исследовании сильно напитавшихся самок клещей объём капли может быть увеличен до 50 мкл (0,05 мл). исследуемого членистоногого помещают в каплю брюшком кверху и0, придерживая глазным пинцетом, либо другим инструментом, иссекают его тело препаровальной иглой.

4.2. Постановка РНИФ.

4.2.1. В лунку предметного стекла переносят жидкую фракцию приготовленной суспензии (10-20 мкл), не допуская попадания крупных частиц.

4.2.2. В одну или две свободные лунки предметного стекла вносят по 10 мкл (0,01 мл) антигена возбудителя БЛ (К+).

4.2.3. препарат высушивают при комнатной температуре или в термостате (при 37°С), ополаскивают дистиллированной водой и снова высушивают.

4.2.4. Затем во все лунки вносят по 10 мкл (0,01 мл) иммунной сыворотки. инкубируют во влажной камере при 37°С 30 минут.

4.2.5. По окончанию инкубации стекло ополаскивают дистиллированной водой и отмывают в ЦФБ в течение 15 минут на магнитной мешалке или вручную, снова ополаскивают дистиллированной водой и высушивают.

4.2.6. В каждую лунку вносят по 10 мкл (0,01мл) конъюгата. Инкубируют во влажной камере при 37°С в течение 30 минут.

4.2.7. по окончании инкубации стекло ополаскивают дистиллированной водой, отмывают в ЦФБ в течение 15 минут на магнитной мешалке или вручную, снова ополаскивают дистиллированной водой и высушивают.

5. УЧЁТ РЕАКЦИИ И ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ

Препарат исследуют в люминесцентном микроскопе типа «Люмам» с водно-иммерсионным объективом х70, тубусом х1,6 и окуляром не менее х6,3 или масляным иммерсионным объективом х90, тубусом х1,1 и окуляром не менее х5.

Сначала исследуют лунки с положительным контролем. К просмотру материала приступают только в том случае, если в лунках с К+ наблюдается чётко выраженная изумрудно-зелёная окраска антигена (боррелий). Каждую лунку препарата внимательно просматривают, обращая внимание на периферийные и свободные от посторонних частиц зоны. Обнаружение окрашенных в ярко зелёный цвет спирохет, идентичных в лунках с К+, даже в единичных экземплярах, расценивается как положительный результат. Следует иметь в виду, что при исследовании фрагментов клещей или сильно напитавшихся самок, отрицательный результат может быть менее достоверен, чем при исследовании голодных или слабо напитавшихся клещей.

ПРИМЕЧАНИЕ:

Отработанные предметные стёкла могут быть использованы повторно после их дезинфекции в 6% растворе перекиси водорода в течение 30 минут, мытья в растворе детергента, прополаскивания в проточной, а затем в дистиллированной воде и высушивания.

6. ФОРМА ВЫПУСКА

Набор иммунофлюоресцентный для выявления возбудителя БЛ в переносчиках выпускается в виде упакованного комплекта. Один набор рассчитан на проведение 120 исследований, включая контроль.

7. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ

Набор хранится при температуре -20°С. При транспортировке следует избегать размораживания. При случайном размораживании необходимо убедиться, что при проведении контроля К+ с иммунной сывороткой отмечается чёткий положительный результат. В этом случае набор можно использовать по назначению. флаконы с концентратом солей для приготовления ЦФБ и предметные стёкла можно хранить при любой температуре. Сроки годности набора (6 месяцев со дня выпуска) указан на этикетке. Дальнейшее использование данной серии возможно после проведения повторного контроля антигена возбудителя БЛ (п. 2.2.) с иммунной сывороткой (п.2.1.).

Приложение 5

Инструкция по профилактике заболеваний весенне-летним энцефалитом и болезнью Лайма. (Памятка населению)

1. Одежда для посещения леса, особенно в весеннее время, должна быть из плотной, неворсистой ткани, плотно облегать кисти рук и голень, лучше на резинках или на манжетах. Лучшая обувь – резиновые сапоги, в которые заправляются брюки.

2. При выборе мест отдыха, туристических стоянок или просто прогулок по лесу следует избегать участков леса с обилием кустарниковой растительности, высокой травы и ельников – это излюбленные места обитания клещей.

3. Своевременное удаление ползающих по телу и присосавшихся клещей является эффективным средством предупреждения заболеваний. После каждого посещения леса необходимо проводить самоосмотр тела или взаимоосмотры.

4. Главное правило – не дать возможность клещу вас укусить. Менее 1% клещей в Беларуси заражены вирусами Лайм-боррелиоза и энцефалита. Самцы кровью не питаются, опасность представляют самки, личинки и нимфы.

5. Приведенных с прогулки собак, необходимо тщательно осмотреть, удалить клещей, не пускать в спальные помещения. Это относится к любым животным, посещающим лес.

6. Не рекомендуется оставлять в спальных помещениях букеты цветов, ягоды, другие предметы, принесённые из леса – на них могут также находиться клещи.

7. Одежду, в которой посещали лес, следует тщательно вытряхнуть и поместить вне жилых помещений.

8. Если клещ всё-таки смог присосаться, его следует осторожно расшатывая, отделить от тела, стараясь не оторвать хоботок, и сжечь на огне. Ни в коем случае не раздавливать ногтями или пальцами. Это может привести к механическому заражению при попадании вируса на слизистые оболочки глаз, рта, носа или кожные ранки.

9. Если укуса избежать не удалось, необходимо внимательно следить за своим состоянием своего здоровья в течение нескольких недель после укуса клеща. При появлении симптомов заболеваний, срочно обращайтесь к врачу.

10.Симптомы клещевого энцефалита: общее недомогание, постоянная головная боль, повышенная температура, боли в шее при наклонах головы вперёд, потеря равновесия при глубоких наклонах тела.

11. Для экспресс-профилактики КЭ при присасывании иксодовых клещей рекомендуется применять антибиотик линкомицин, который активно подавляет репродукцию вируса. Препарат назначают перорально по 1 таблетке 3 раза в день в течение 4–5 дней в первые 2–3 дня после укуса. Еще более эффективным является обкалывание места присасывания клещей линкомицином. При позднем обращении за медицинской помощью (4–5-й день после укуса клеща) линкомицин следует назначать парентерально в фармакопейных дозах (Цвирко Л.С., Мишаева Н.П., Згировская А.А., Савицкий Б.П., 2003).