Отчет по практике: Биохимические показатели крови беременных женщин

Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

ПЕНЗЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

ЕСТЕСТВЕННО-ГЕОГРАФИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

Кафедра биохимии

Отчет о практике по специализации

МУЗ «Пензенский городской родильный дом №1»

Биохимические показатели крови беременных женщин

Студентка гр. БХ-41 Стексова Н.А.

«____»________________ 2009г.

Руководитель практики от ВУЗа:

________________ Генгин М.Т.

«____»________________ 2009г.

Руководитель практики от организации:

______________ Ирышкова Е.Т.

«____»________________ 2009г.

Пенза, 2009г.

Содержание

1 Общая информация о месте прохождения практики

2 Методы исследования

2.1 Определение глюкозы в крови на анализаторе глюкозы ECO TWENTY

2.2 Определение креатинина в крови на биохимическом анализаторе ROKI

2.3 Определение мочевины в крови на биохимическом анализаторе ROKI

2.4 Определение билирубина в крови на биохимическом анализаторе ROKI

2.5 Определение общего белка в крови

3 Краткий обзор литературы по проблеме: Изменения биохимических показателей крови при беременности

4 Результаты исследований

5 Интерпретация полученных данных

Список литературы

1 Общая информация о месте прохождения практики

Клинико-диагностическая лаборатория городского родильного дома №1, находящаяся по адресу ул. Пушкина, 56, является структурным подразделением МУЗ «Пензенский городской родильный дом №1», который включает в себя городской родильный дом по адресу ул. Пушкина,56, городской родильный дом по адресу проспект Победы и 3 женских консультации (ул. Красная, ул. 8 Марта, ул. Гагарина).

Клинико-диагностическая лаборатория располагается в изолированном крыле здания родильного дома.

Разделы КДЛ Родильного дома №1:

1.  гематологический;

2.  цитологический;

3.  общеклинический;

4.  иммунологический;

5.  биохимический.

Клинико-диагностическая лаборатория оснащена необходимой мебелью и медицинским оборудованием:

1.  термостат;

2.  сухо-жаровой шкаф;

3.  холодильники;

4.  вытяжной шкаф;

5.  рефрактометр;

6.  весы торсионные;

7.  автоматизированный гематологический анализатор МЕК-6400;

8. полуавтоматический анализатор мочи Aution Eleven;

9.  анализатор глюкозы ECO TWENTY;

10. биохимический анализатор ROKI;

11.  микроскопы (моно- и бинокулярный).

Основные задачи, решаемые коллективом: определение уровня клинико-биохимических показателей биопроб для оценки здоровья беременных женщин на разных сроках беременности и новорожденных детей.

Из биохимических методов исследования проводятся следующие биохимические тесты:

1.  общий белок в сыворотке крови;

2.  белковые фракции;

3.  протромбиновый индекс в плазме крови;

4.  фибриноген в плазме крови;

5.  глюкоза в сыворотке крови;

6.  мочевина в сыворотке крови;

7.  билирубин в сыворотке крови;

8.  АЛТ в сыворотке крови;

9.  АСТ в сыворотке крови;

10.  железо в сыворотке крови;

11.  креатинин в сыворотке крови;

12.  креатинин в моче;

13.  функциональная проба Реберга;

14.  амилаза в сыворотке крови;

15.  тимоловая проба в сыворотке крови;

16.  серомукоид в сыворотке крови;

17.  СРБ в сыворотке крови;

18.  глюкоза в ликворе;

19.  исследование системы гемостаза.

2 Методы исследования

2.1 Определение глюкозы в крови на анализаторе глюкозы ECO TWENTY

биохимический кровь беременность

Проба: цельная кровь, сыворотка или плазма.

Необходимые принадлежности:

1) буферный раствор – специальный реагент, изготовленный для амперометрических измерений для смешивания с образцами;

2) пробирки Эппендорфа (пластиковые с крышками, 2мл);

3) стандартный раствор (калибратор) глюкозы 12,0ммоль/л;

4) капиллярные трубки на 20мкл для забора крови без пузырьков.

Принцип действия: образец автоматически всасывается в систему датчиков. Глюкоза в крови энзиматически преобразуется при помощи глюкозооксидазы. Количество образовавшегося продукта (перекись водорода) количественно определяется по датчику. После измерения система и датчик автоматически очищаются и подготавливаются для следующего измерения.

Ход определения:

1) включить в сеть (5-10мин приведение в готовность);

2) на сенсорном экране появляется меню;

3) произвести необходимые настройки меню, нажать «Start»;

4) обработка каждого образца и выдача чеков с результатами идет автоматически.

Подготовка образцов:

1) кровь взять с помощью специальных капилляров (20 мкл);

2) смешать в пробирке с реактивом (1000мкл), перемешать, не встряхивать сильно, чтобы не образовалась пена (иначе кровь гемолизируется);

3) пробирки загрузить в лоток (сначала стандарт, затем опытные образцы).

В пробирке 20мкл крови и 1000мкл реагента.

Автоматическая калибровка каждые 30 мин. Ошибки при измерениях до 1,5%. Анализатор останавливается автоматически, если калибровка не принимается или контрольные образцы выходят за установленные пределы.

2.2 Определение креатинина в крови на биохимическом анализаторе ROKI

Принцип метода: скорость образования окрашенного комплекса креатинина с пикриновой кислотой в щелочной среде пропорциональна концентрации креатинина в пробе.

Исследуемый материал: сыворотка или плазма крови. Гемолизированная сыворотка или плазма крови для анализа не пригодна.

Состав набора:

Реагент №1. Пикриновая кислота (100 мл).

Реагент №2. Натрий едкий (100мл).

Калибратор – раствор креатинина 17,7ммоль/л (2мл).

Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность:

Рабочий реагент: для исследования смешайте реагенты №1 и №2 в соотношении 1:1. нагрейте рабочий реагент до температуры 37⁰С.

Рабочий раствор калибратора: для исследования разведите калибратор в 100 раз дистиллированной водой. Полученная концентрация 177мкмоль/л. Процедура анализа:

Анализ проводится в термостатируемой (37⁰С) фотометрической кювете с длиной оптического пути 1см при 505нм против воздуха. В кювете смешайте рабочий реагент и исследуемый материал или калибратор в соотношении 5:1 (например, 1мл рабочего реагента и 0,2мл исследуемого материала). Через 1 минуту измерьте оптическую плотность (Е₁). Повторите измерение точно через 60сек (Е₂). Вычислите величину ΔЕ=Е₂ – Е₁.

Расчет концентрации креатинина (С):

В сыворотке (плазме)

;

ΔЕ_пробы – изменение оптической плотности исследуемой пробы,

ΔЕ_калибр – изменение оптической плотности калибровочной пробы,

177мкмоль/л – концентрация креатинина в разведенном калибраторе,

Если концентрация креатинина превышает 880мкмоль/л в сыворотке (плазме) разведите исследуемые образцы в 5 раз физиологическим раствором и повторите определение; результат умножьте на 5.

2.3 Определение мочевины в крови на

биохимическом анализаторе ROKI

Принцип метода: метод основан на оптическом тесте Варбурга с использованием сопряженных ферментативных реакций, приводящих к образованию в инкубационной среде НАД:

Мочевина + Н₂О← уреаза → 2NH₃ + CO₂;

NH₃ + α-кетоглутарат + НАДН₂ ← глутаматдегидрогеназа → L-глутамат + НАД + Н₂О.

Скорость окисления НАДН₂ в НАД пропорциональна концентрации мочевины в пробе.

Исследуемый материал: негемолизированная сыворотка или плазма крови.

Состав набора:

Реагент №1: 0,05М трис-буфер, рН 8,0 (60мл).

Реагент №2: Стабилизированный раствор фермента: уреаза – 8000Ед/л, глутаматдегидрогеназа – 700Ед/л (20мл).

Реагент №3: Стартовый реагент: НАДН₂ – 160мг/л (20мл).

Калибратор: Раствор мочевины – 13,3ммоль/л (800мг/л).

Процедура анализа:

I. Анализ с использованием исследуемого образца в качестве стартового реагента. Рабочий реагент: смешайте реагенты №1,2,3 в соотношении 3:1:1. В кювете фотометра с длиной оптического пути 1см смешайте рабочий реагент и исследуемый образец (или калибратор) в соотношении 100:1 и через 1мин измерьте величину экстинкции при 340нм против воды (Е₁). Точно через 60сек повторите измерение (Е₂). ΔЕ=Е₁ – Е₂.

II. Анализ с использованием НАДН₂ в качестве стартового реагента. Рабочий реагент: смешайте реагенты №1 и 2 в соотношении 3:1. В кювете фотометра (1см) смешайте рабочий реагент и исследуемый образец (или калибратор) в соотношении 80:1. Через 1мин добавьте реагент №3 в объеме, равном ¼ взятого объема рабочего реагента, перемешайте и через 1мин измерьте величину экстинкции при 340нм против воды (Е₁). Точно через 60сек повторите измерение (Е₂). ΔЕ=Е₁-Е₂.

Расчет концентрации (С) мочевины в исследуемом образце:

Сыворотка:

 или

.

2.4 Определение билирубина в крови на биохимическом анализаторе ROKI

Принцип метода: прямой (связанный, конъюгированный с глюкуроновой кислотой) билирубин непосредственно реагирует с диазотированной сульфаниловой кислотой, а общий билирубин – в присутствии кофеинового реагента с образованием окрашенного азосоединения. Интенсивность окраски реакционной среды пропорциональна концентрации билирубина и измеряется фотометрически при длине волны 535нм (500-560нм).

Исследуемый материал: сыворотка крови без следов гемолиза. Пробы стабильны 2 часа при комнатной температуре в защищенном от света месте.

Состав набора:

Реагент №1: Кофеиновый реагент (200мл).

Реагент №2: Сульфаниловая кислота (55мл).

Реагент №3: Натрия нитрит (2мл).

Реагент №4: Физиологический раствор (250мл).

Калибратор: 85,5мкмоль/л (в 2мл дистиллированной воды).

Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность:

Диазореактив: смешайте реактивы №2 и №3 в соотношении 100:2,5. Хранить в посуде из темного стекла при температуре 2-8⁰С.

Содержимое флакона с калибратором растворите в 2мл дистиллированной воды. После полного растворения концентрация билирубина равна 85,5мкмоль/л. Хранить в защищенном от света месте при температуре 2-8⁰С.

Процедура анализа:

Пробы тщательно перемешайте. Для определения прямого билирубина точно через 5 минут (при комнатной температуре) измерьте величину экстинкции опытной пробы против соответствующей контрольной пробы при 535нм (500-560нм). Для определения общего билирубина через 20 минут (при комнатной температуре) измерьте величину экстинкции опытной пробы против соответствующей контрольной пробы при 535нм (500-560нм). Экстинкцию калибратора измерьте против дистиллированной воды через 20 минут при 535нм.

Расчет концентрации билирубина в пробе (С):

, где

Е_пробы – экстинкция опытной пробы;

Е_калибр - экстинкция калибровочной пробы;

85,5 – концентрация билирубина в калибраторе.

2.5 Определение общего белка в крови

Определение проводится рефрактометрическим методом. С помощью пипетки взять каплю сыворотки крови и нанести ее на рефрактометр. Снять показания. С помощью таблицы пересчета определить содержание общего белка в сыворотке крови.

3 Краткий обзор литературы по проблеме: Изменения биохимических показателей крови при беременности

Биохимический анализ крови - это анализ крови, позволяющий оценить работу многих внутренних органов - почек, печени, поджелудочной железы и др. Биохимия крови позволит выявить нарушения в работе внутренних органов тогда, когда ещё нет никаких внешних симптомов болезни. Биохимический анализ покажет изменение в крови даже если структура самого органа ещё не пострадала, а нарушения носят функциональный характер.

При существенных изменениях биохимического состава крови возникает угроза преждевременных родов, разнообразных нарушений в развитии ребенка (например, при дефиците железа мать и ребенок страдают от анемии, то есть от нехватки кислорода, при недостатке кальция, фосфора и белков нарушается развитие опорно-двигательного аппарата ребенка). Биохимический анализ крови позволяет выявить первые признаки такого серьезного осложнения течения беременности, как поздний гестоз, — по результатам анализа можно судить о степени нарушения функции почек и, соответственно, проводить необходимое лечение.

Биохимический анализ крови делают в самом начале беременности, при постановке беременной на учет. Повторно биохимию крови делают в 30 недель беременности, если не требуется чаще. Набор исследуемых позиций определяет врач. Кровь на биохимический анализ берут из вены утром натощак. Должно пройти не менее 12 часов с последнего приема пищи.

Общий белок - показатель белкового обмена, отражающий общее содержание всех белков в сыворотке крови. Их концентрация зависит в основном от соотношения между скоростью синтеза и выведения из организма. У беременных, в связи с возможными потерями белка с мочой из-за развития гестационных осложнений, необходимо определять общий белок и его фракции.

Концентрация общего белка в сыворотке крови зависит от содержания двух основных белковых фракций - альбумина и глобулинов. Альбумин составляет около 60% общего белка, он на 65-80% обуславливает онкотическое давление плазмы и выполняет функцию транспортировки многих биологически активных веществ, в частности гормонов, холестерина, билирубина, кальция и др. Концентрация сывороточного альбумина во время беременности уменьшается на 10-60%, что связано с увеличением ОЦК и гемодилюцией. Основную часть глобулинов составляют белки острой фазы воспаления, компоненты комплемента, иммуноглобулины. Закономерно, что гиперпротеинемия чаще связана с гиперглобулинемиями, а гипопротеинемия обычно обусловлена гипоальбуминемией.

Глюкоза - основной субстрат энергообразования и структурный элемент любой клетки. Уровень глюкозы крови при физиологической беременности меняется неоднозначно и может как оставаться на обычном уровне, так и снижаться или несколько повышаться, при этом не достигая уровня гипергликемии. Изменения уровня глюкозы крови у беременной женщины связаны с гормональной деятельностью плаценты (секреция кортизола и плацентарного лактогена, являющихся контринсулярными гормонами) и деятельностью инсулина, в обмене которого при беременности характерно развитие инсулинорезистентности и компенсаторного постепенного роста секреции инсулина. Снижение резистентности периферических тканей зависит от снижения капиллярного кровотока, нарушения трансэндотелиального обмена инсулина с клетками-мишенями и изменением пострецепторного эффекта. Баланс этих процессов и определит уровень глюкозы.

Билирубин. После разрушения эритроцитов в селезёнке происходит превращение Hb, миоглобина, цитохромов в свободный (несвязанный, непрямой, неконъюгированный) билирубин. Последний, связываясь с альбуминами, транспортируется в печень. В гепатоцитах он преобразуется в связанный (прямой, конъюгированный) билирубин, выделяющийся в составе желчи в желчный пузырь и далее в желудочно-кишечный тракт. Лишь небольшая его часть всасывается в нижних отделах толстой кишки и выводится почками с мочой в виде уробилина. Большая часть билирубина, достигшего подвздошной и толстой кишок, окисляется до стеркобилиногена, выделяющегося с калом. Определение концентрации различных форм билирубина в крови и моче позволяет сделать заключение об интенсивности процессов гемолиза, функции гепатоцитов и транспорте желчи. Серьёзные нарушения этих процессов сопровождаются гипербилирубинемией, проявляющейся желтухой. Она появляется при уровне билирубина в крови выше 27-34 мкмоль/л. Однако если концентрация соответствует верхней границе нормы или незначительно превышает её, на это необходимо обращать внимание, так как билирубин токсичен (в первую очередь для клеток головного мозга).

Мочевина - конечный продукт метаболизма белков в организме, её выведение происходит посредством клубочковой фильтрации и тубулярной секрециии. Уровень содержания мочевины в сыворотке крови зависит от соотношения процессов образования и выведения, это показатель в первую очередь характеризует работу почек. Пониженная концентрация мочевины в плазме крови особого диагностического значения не имеет, повышенная (азотемия) - в большинстве случаев свидетельствует о нарушении выделительной функции почек.

Креатинин - конечный продукт распада креатина, играющего важную роль в энергетическом обмене мышечной и других тканей. Концентрация креатинина в сыворотке крови зависит от его образования и выведения путём клубочковой фильтрации. В отличие от мочевины он не реабсорбируется в почках, в меньшей степени зависит от уровня катаболизма, поэтому в большей мере отражает степень нарушения выделительной и фильтрационной функции почек. Уменьшение содержания креатинина в сыворотке крови диагностического значения не имеет. Повышение уровня креатинина в крови - очевидный признак почечной недостаточности.

Концентрация креатинина крови у беременных женщин физиологически снижена (на 40%) вследствие увеличения объема крови, повышения почечного плазмотока и фильтрации, особенно во втором и третьем триместрах беременности.

БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ АНАЛИЗА КРОВИ

* Наиболее выраженное снижение в I и II триместре беременности.

4 Результаты исследований

Биохимические показатели крови беременных женщин

Аскерова О.В. (36 нед)

Балакина О.В. (35 нед)

Баландина А.И. (35 нед)

Тарасова Е.В. (36 нед)

Кудряшова Л.В. (36 нед)

Такарова Ч.В. (35 нед)

Перегудова Е.Н. (36 нед)

Краснова И.В. (35 нед)

Насонова И.В. (35 нед)

Самойлова Н.А. (36 нед)

Группа сравнения – небеременные женщины в возрасте 20-35 лет

5  Интерпретация полученных данных

После анализа полученных данных можно сделать следующие выводы:

1. Биохимические показатели крови беременных и небеременных женщин различны, вследствие того, что при не осложненной беременности в организме женщины происходит целый ряд адаптационно-приспособительных процессов, направленных на обеспечение адекватного течения гестационного периода, роста и развития плода. Значительная перестройка жизнедеятельности организма беременной сопряжена с изменениями в системах крови, гемостаза, эндокринной, иммунной, биохимического состояния организма.

2. В крови беременных женщин часто снижена концентрация общего белка по сравнению с небеременными. Небольшое снижение общего белка (55-65 г/л) во время беременности не является патологией. Оно обусловлено как частичным разведением, в результате задержки жидкости в организме, так и понижением концентрации альбумина в результате усиленного расходования его на биосинтетические процессы. Однако нельзя исключить фактор повышения проницаемости сосудов и перераспределение жидкости и белка в межклеточном пространстве, нарушение гемодинамики. Но все же снижение концентрации общего белка ниже 70 г/л должно настораживать относительно возможного появления позднего токсикоза. Чем тяжелее и продолжительнее токсикоз, тем больше выражены явления гипо- и диспротеинемии. Снижение концентрации общего белка ниже 50 г/л и стойко нарастающая диспротеинемия свидетельствуют об очень тяжелом течении позднего токсикоза и являются неблагоприятным прогностическим показателем для матери и плода. Повышение концентрации белка в сыворотке крови наблюдается вследствие патологии: дегидратация (обширные ожоги; тяжёлая травма; холера); острые инфекции - результат дегидратации и синтеза белков острой фазы; хронические инфекции - повышенное образование иммуноглобулинов; парапротеинемические гемобластозы (миеломная болезнь, болезнь Вальденстрема).

3. Уровень глюкозы в крови здоровых беременных женщин может быть немного снижен (до 3,5-4,0ммоль/л), поскольку растущий плод потребляет все большее количество глюкозы. Это не является признаком патологии. Повышенный уровень глюкозы можно рассматривать как признак патологии – относительная недостаточность инсулина и, как следствие, развитие гестационного диабета (диабета беременных).

4. Часто наблюдается повышение концентрации мочевины и креатинина в крови беременных женщин, что свидетельствует о различных заболеваниях почек. Азотемия в большинстве случаев свидетельствует о нарушении выделительной функции почек. Увеличение креатинина в сыворотке крови говорит об уменьшении уровня почечной фильтрации (снижении функции почек), очевидный признак почечной недостаточности. Концентрация креатинина крови у беременных женщин физиологически снижена (на 40%) вследствие увеличения объема крови, повышения почечного плазмотока и фильтрации, особенно во втором и третьем триместрах беременности. Для беременных нормальный уровень креатинина - 35-70 мкмоль/л.

Полученные данные и их интерпретация подтверждаются литературными данными.

Список литературы

1. Справочник по клиническим лабораторным методам исследования. Под ред. Е.А. Кост. М.: «Медицина», 1992г.

2. Лабораторные методы исследования системы гемостаза. В.П. Балуда, З.С. Баркаган, Е.Д. Гольдберг, Б.И. Кузник, К.М. Лакин. 1985г.

3. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник. Под ред. В.В. Меньшикова. – М.: Медицина,1994г.

4. Справочник по клинической химии. Колб В.Г., Камышников В.С. – Мн.: Беларусь, 1988г.

5. Н.Овсепян. Биохимический анализ крови /Журнал "9 месяцев" № 3, март 2008 г.

6. Берёзов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия, Москва, «Медицина», 2004.

7. А.Уайт, Ф.Хендлер, Э.Смит Основы биохимии в 3-х томах, «Мир»,1981г.

8. Комов В.П. Шведова В.Н. Биохимия, Москва, «Дрофа», 2006.

9. Б.А.Никулин Пособие по клинической биохимии, ГЭОТАР-Медиа, 2007 г.

10. Стайер Л. Биохимия. — М., 1984. – Т. 1—3.

11. В.В. Долгов, П.В. Свирин. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза, М: 2005г, кафедра КЛД, РМАПО