Применяется много питательных сред, но основными ингридиентами их являются физиологический раствор, сыворотка   и углеводы.

Рекомендуют использовать простую сывороточную среду. Она проста в приготовлении и дает хороший рост трихомонад. Для ее приготовления берут 9 частей стерильного физиологи­ческого раствора, добавляют 1 часть лошадиной или бычьей сыворотки и 1 петлю стерильного рисового крахмала.   Среду разливают в стерильные пробирки по 5-10 мл.

Наш опыт по культуралъной диагностике ротовых простей­ших показал, что простая сывороточная среда не всегда дает положительные результаты. Очевидно, это связано с региональ­ными физико-химическими характеристиками воды, из   которой готовят физиологический раствор. Физиологический раствор, приготовленный аптекой, у нас всегда имел  рН 5,1 и питатель­ная среда на таком растворе без добавления буферных солей роста трихомонад не давала.

Поэтому мы рекомендуем применять среду Павловой. Способ приготовления: хлористый натрий - 4,25 г, двузамещенный фос­форнокислый натрий   /Na₂HPO₄  X  2 H₂O₂ , можно и  Na₂HPO₄  X  12 H₂O₂ - 0,3 г, однозамещенный фосфорнокислый   калий / K₂HPO₄  - 0,23 г, дистиллированная вода - 500,0 мл. Раст­вор стерилизуют в автоклаве при 1,5 атм в течение 20 минут. Перед засеванием материала раствор разливают в пробирки по 9,5 мл, добавляют О,5 мл лошадиной сыворотки и петлю стериль­ного рисового крахмала.

В качестве сыворотки применяют нормальную лошадиную сыворотку для приготовления питательных сред или сыворотку лошадиную сухую. Предварительно флакон с нормальной лошадиной сывороткой раскупоривают и оставляет в термостате на 3-е су­ток для испарения консерванта, а сухую растворяют в дистил­лированной воде.

Культуральным методом на среде Павловой десневые амебы выявлены в незначительном числе /3,74% из всех положитель­ных результатов, полученных другими протозоологическими ме­тодами/, поэтому для выделения их лучше использовать среду следующего еоетава: физиологический раствор - 1000,0 мл, мясо-пептонный бульон - 20,0 мл,  печеночный экстракт -20,0 мл, глюкоза - 2,5 г, Na₂HPO₄- 0,45 г, K₂HPO₄ - 0,45 г, рН = 7,4- 7,8, К простерилизованной среде добавляют 10,0 -15,0 мл инактивированной лошадиной сыворотки, разливают в пробирки; по 6— 10,0 мл ив каждую вносят 1-2 петли стерильного рисового крахмала.

Амебы развиваются в щелочной среде, а трихомонады предпочитают кислую.

Рост трихомонад на жидкой питательной среде Павловой выявлен в 76,92% среди всех положительных случаев. Определение в культуре этих простейших не представляет особого тру­да, посколько в поле зрения скапливается от 5 до 30-50 осо­бей. Незначительная часть ротовых трихомонад имеет тот   же вид, что и в нативном препарате. Подавляющее же число особей округляется, приобретает шарообразную форму. В цитоплазме видны заглоченные зерна крахмала. Выбрасывание жгутиков ак­тивное,  у некоторых крупных трихомонад можно увидеть движе ние ундулирующей мембраны в виде волны, пробегающей по длиннику тела.

4. ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ ПРОТОЗООСКОПИЯ

Учитывая, что в некоторых случаях протозооскопия окра­шенных препаратов не позволяет четко отдифференциовать мел­кие особи десневых амеб без фагоцитированых лейкоцитов, ваку­олей, псевдоподий от ротовых трихомонад, предложено использо­вать люминесцентную протозооскопию.

Принцип  метода: приготовлений мазок или отпечаток обрабатывают флюоресцирующим веществом, после чего объект, невидимый в ультрафиолетовом свете, приобретает иной цвет.

Оборудование  и  реактивы:

- корневая игла с турундой;

- предметное стекло;                                                       

-фиксатор /10% раствор формалина/;

- флюоорохром /акридин оранжевый 1:10 000/;

- люминесцентный микроскоп.

Содержимое пародонтальных карманов переносят на предмет­ное стекло в виде отпечатка или мазка, высушивают, фиксируют в10% растворе формалина в течение 10 минут, вновь высушива­ют и окрашивают раствором акридина оранжевого в течение 1 мину­ты. Микроскопию производят с иммерсионным объективом 90.

Впервые морфологическая характеристика ротовых простей­ших при помощи люминесцентной микроскопии дана П.С.Флис /1976/.

Десневые амебы, окрашенные флюорохромом, хорошо опреде­ляются. Для них характерно темно-зеленое свечение цитоплаз мы и более светло окрашенное ядро.       

Ротовые трихомонады тоже имеют специфическое свечение. Цитоплазма окрашивается в кирпично-красный цвет, ядро люминесцирует достаточно ярко белесовато-оранжевым цветом. Чет­ко виден аксостиль, жгутики чаще не определяются.

Лейкоциты, создающие фон препарата, имеют зеленоватый оттенок.    

Не всегда ротовые простейшие обнаруживаются сразу все­ми методами. Каждый из вышеназванных методов имеет свои пре­имущества и недостатки.

Протозооскопия нативного препарата в должной мере явля­ется объективным методом, однако его применение должно быть непосредственно после взятия материала и любое промедление во времени приводит к снижению двигательной активности трихомонад, что в дальнейшем приведет к затруднению в дифференциации с другими клеточными элементами.

Окрашенный препарат пригоден для выявления десневых амеб, но обильный фон в препарате не позволяет обнаружить единичные экземпляры трихомонад. В препарате, приготовленном в виде мазка, легче находить как десневые амебы, так и трихомонады, но при этом возникает необходимость просмотра большой пло­щади мазка.

Культуральным методом на среде Павловой целесообразно выявлять только Trichomonas tenax. Недостатком метода является мень­шая частота выявляемости простейших по сравнению с мазком. Это связано в большей части с техническими погрешностями: ма­ло материала для исследования, помещение материала в не подо­гретую среду, несоблюдение режима инкубации, рН среды и т.д.

Указанные недостатки компенсируются тем, что диагностику протоинвазии осуществляют параллельно всеми методами.

Техника диагностических протозоологических исследований проста, оборудование и реактивы доступны для лабораторий и стоматологических учреждений любого уровня. Несмотря на это выявление ротовых простейших требует натренированности, тер­пения и внимания лаборантов.

СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ ПРОТОИНВАЗИИ ПОЛОСТИ РТА

Терапия пародонтита строится на принципах максимально индивидуализированного комплексного подхода с учетом общего и местного статуса больных. Весь комплекс лечебных меропри­ятий должен быть направлен на ликвидацию этиологических и пато­генетических звеньев развившегося процесса. У больных пародонтитом с инвазией ротовыми трихомонадами среди этих меро­приятий важное значение приобретает воздействие на простей­ших в пародонтальных карманах. С этой целью применяют специ­фические протистоцидные препараты для местного и общего ле­чения.

Для местной терапии используют 1% р-р трихопола, 1% р-р трихомонацида, р-р фурацилина 1:5000, 1% р-р мефенамината натрия, 1,5% р-р метиленового синего, 0,5-1% р-р перманганата калия, 40% р-р гексаметилентетрамина. Вышеуказанные пре­параты вводят в пародонтальные карманы в виде инсталляций и орошений.

При выборе метода введения и экспозиции лекарственного вещества следует учитывать сроки гибели трихомонад.

По данным з.а.флис, И.А.Бенюмовой /1976/ растворы трихопола, трмхомонацида, фурацилина в раздавленной капле куль­туры протистов оказывают губительный эффект на 30-40 минуте, иногда на 60-й. Следовательно, их рационально оставлять в пародонтальных карманах под повязкой.

Свежеприготовленный 1% р-р мефенамината натрия на 5-18 минуте обездвиживает трихомонады, а хранившийся длительное время оказывает эффект на 20-30-й минуте.

0,5-1% раствор перманганата калия обездвиживает прос­тейших на 10-30-й минуте. Эти вещества целесообразно вводить в виде инстилляций на турундах, при этом необходима частая замена на свежие турунды, так как концентрация лекарств сни­жается вследствие разбавления слюной, кровью, экссудатом.

Очень удобно иметь в кабинете навески с порошком мефенамината натрия по 0,5 г. Из них легко приготовить свежий 1% раствор /0,5 г порошка растворить в 50,0 мл дистиллированной воды/.

Гексаметилентетрамин /уротропин/ по нашим наблюдениям в большинстве случаев вызывает не только обездвиживание, но и распад трихомонад на протяжении 1-2-х минут. Им можно оро­шать пародонтальные карманы при помощи распылителя стоматоло­гической установки.

Результаты наших исследований показали, что после воздействия на трихомонад 0,02% раствором декаметоксина основная масса особей прекращает движение на 4-7 минуте, 0,05% раствор хлоргексидина снижает двигательную активность простейших или прекращает ее на 7-10-й минуте.

Несмотря на положительный протистоцидный эффект указан­ных препаратов в раздавленной капле применение их в клинике не всегда приносит желаемый результат. Очевидно, это связано с труднодоступностью зубодесневых карманов.

Перед внесением лекарственных веществ следует тщательно удалить зубные отложения, провести обильное орошение карманов другими антисептическими средствами. Это будет способствовать механическому вымыванию простейших, микрофлоры, экссудата и таким образом протистоцидные препараты могут непосредственно воздействовать на паразитов.

Чувствительность Trichomonas tenax к лекарственным средствам имеет индивидуальные штаммовые колебания. Для выяснения протистоцидного эффекта назначаемого лекарства мы рекомендуем проводить определение чувствительности ротовых трихомонад в раздавленной капле.

С этой целью каплю штамма Trichomonas tenax₉ выращенной на пи­тательной среде, помещают на предметное стекло, покрывают покровным стеклом, добавляют исследуемое лекарственное вещество и исследуют под микроскопом. Сроком гибели простейших считают то время, когда наступил их распад.

Местная терапия не во всех случаях приводит к санации пародонтальных карманов от простейших. Обязательным условием для получения положительного результата является назначение протистоцидных препаратов внутрь.

Наиболее широкое применение получил трихопол /метрони-дазол) Его назначают по 0,25 г 2 раза в день в течение 10 дней или по одной из следующих схем:

1/ 1-й день - 0,5 г 2 раза в сутки; 2-й день - 0,25 г 3 раза в сутки; 3-4-5-6-й день - 0,25 г 2 раза в сутки.

2/ 1-й день и 2-Й день - 0,25 г 4 раза в сутки; 3-й и 4-й день - 0,25 г 3 раза в сутки; 5-6-7-й день - 0,25 г 2 раза в сутки ,

З/ по 0,25 г 4 раза в сутки в течение 5 дней.

Курсовая доза трихопола должна составлять 5,0 г.

Противопоказанием к назначению трихопола являются забо­левания кроветворных органов, ЦНС, беременность. Во время приема препарата нельзя употреблять алкоголь, так как при взаимодействии с ним образуется дисульфирам, который способст вует возбуждению и развитию психоза.

В последнее время во всем мире регистрируется увеличе­ние числа штаммов, резистентных к трихополу.

Нитазол /трихоцид, трихолавал/. Назначают по 0,1 г 3 раза в сутки после еды в течение 15 дней. Через 7-10 дней курс повторяют.

Тинидазол /фасижин/. Назначают 4 таблетки по 0,5 г за один прием во время или после еды. Противопоказания к назна­чению такие же, как и у трихопола.

Макмирор /нифурател/. Помимо протистоцидного эффекта оказывает влияние на смешанную бактериальную флору /стрепто­кокки, стафилококки, кишечная палочка, протей/, грибки {Candida albikans). Активность воздействия на трихомонад в 10 раз выше, чем у метронидазола. Назначают по 3-6 таблеток /по 200 мг/ в день в течение 1-2 недель.

Следует подчеркнуть, что лечение пародонтита протистоцИдными препаратами проводят обязательно в комплексе с дру­гими мероприятиями /консервативными, хирургическими, ортопедическими/. Не устранив пародонтозогенную ситуацию в полости рта, нельзя надеяться на удовлетворительный резуль­тат.