Кормление крыс генетически модифицированной кукурузой

КОРМЛЕНИЕ КРЫС ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННОЙ КУКУРУЗОЙ

Арпад Пуштай (Arpad Pushtai)

Оценка и комментарий к отчету о 13-неделъном субхроническом сравнительном исследовании по кормлению крыс МОN 863 с предшествующим 1-недель­ным установлением базального потребления пищи с РМ1 сертифицированной диетой №5002 ("Отчет МSL-18175/Соvапсе Studу Nо. 6103-293"). Данный текст касается только результатов исследования по кормлению МОN 863. Несмотря на то что результаты других исследований, проведенных с МON 863, не яв­ляются конфиденциальными и, таким образом, могут быть доступны широкой публике, мои комментарии будут строго привязаны к исследованию по кормлению.

Общий комментарий

Дизайн исследования недостаточно продуман, со­держит множество упущений и пробелов и не соответ­ствует современному уровню, ожидаемому от исследо­ваний подобной важности. Во многих случаях экспе­рименты выполнены неудачно, а представление их результатов является фрагментарным, повторяющим­ся, нечетко изложенным и запутанным. Несмотря на то что результаты сведены в большие таблицы, содержа­ние этих таблиц в основном неинформативно. В них присутствует множество излишних данных, занимаю­щих колоссальное количество места, но не способству­ющих четкому пониманию. Использование историче­ских значений и сопоставление исследуемой и конт­рольной диет из исходной (родительской) линии с шестью дополнительными референтными диетически­ми группами, может быть, и имело бы некоторую зна­чимость для коммерческих исследований продукта, но не для научного анализа риска, в ходе которого сравне­ние должно вестись между кормлением генетически модифицированной (ГМ) кукурузой и соответствую­щей контрольной диетой (см. ниже). Включение в ис­следование этих дополнительных референтных групп приводит лишь к расширению списка параметров и данных, обрабатываемых в ходе статистического ана­лиза, и, таким образом, к уменьшению шансов выявить значимые различия между тестируемой и контрольны­ми группами.

В любом случае референтные группы используют­ся в дальнейшем сравнении только выборочно, тогда, когда такое сравнение служит целям авторов. Ниже в своих подробных комментариях я конкретно укажу на подобное использование этих данных.

Подробные комментарии

Состав диеты, формулировка и другие релевантные проблемы

Неинформативно и неприемлемо описывать приго­товление диеты как выполненное "согласно инструк­ции", даже в том случае, если некоторые аспекты соста­ва диеты оказываются впоследствии ясны из результа­тов анализов. Например, было заявлено, что МON 863 содержит 11,3% белка, тогда как контрольная линия — только 9,9%. Это — один из примеров разницы в соста­ве диет, которые различались также по количеству пи­щевых волокон и т.д. Как бы то ни было, содержание белка и других ингредиентов в диетах было уравнено, но нигде не говорится о том, откуда в контрольных дие­тических группах появились добавочные 12-13% бел­ка и т.д. Также ничего не говорится об уравнивании и оптимизации содержания незаменимых аминокислот (таких как лизин и др.) в диетах.

Несмотря на то что во время всего периода исследо­вания составленные пищевые смеси хранились при комнатной температуре, нигде не упоминается, остался ли состав диет неизменным или нет, и отслеживались ли возможные изменения. Многие чувствительные к условиям хранения компоненты могли окислиться или каким-либо другим образом измениться, что повлияло бы на пищевую ценность диет. В отчете есть лишь одна отсылка к зарегистрированным весовым измерениям диетической смеси*, и, очевидно, анализ содержания соли был использован в качестве суррогата тестирова­ния гомогенности! Точное описание диеты находится в досье спонсора

Остается не ясным, почему 11%-ная эксперимен­тальная диета была дополнена коммерческой кукуру­зой, а не исходной, родительской линией. В любом слу­чае вполне вероятно, что в США коммерческая куку­руза уже заражена генетически модифицированной, такой, например, как глифосат-устойчивая NК 603.

Самым большим упущением является то, что кроме контрольной группы с исходной линией в диете авторы должны были бы использовать в качестве надлежащего контроля другую группу, в диете которой исходная ли­ния была бы дополнена трансгенным продуктом, изо­лированным от МON 863 кукурузы, но в той же концен­трации, в которой он экспрессируется у МON 863. Та­ким методом можно было бы выявить какие-либо эффекты, связанные со встраиванием конструкта Вt — гена в геном кукурузы.

Методики опытов на животных

К сожалению, как дизайн, так и само проведение исследования по кормлению выполнены неудачно.

По неясным причинам в начале отчета исходный вес крыс приведен как от 198,4 до 259,8 г для самцов и от 132,1 до 185,3 г для самок со среднеквадратичным отклонением ± 2. Однако в приложении 2 (индивиду­альные данные массы тела, начало на с. 161) приведены значения от 143 до 186 г для самцов и от 100 до 169 г для самок.

В результатах заявлено о том, что какого-либо зна­чимого различия между экспериментальной и конт­рольными группами в конечном весе крыс, их росте и потреблении пищи не выявлено. Однако это были сред­ние значения со значительным среднеквадратичным отклонением. Кроме того, диапазон значений за время проведения эксперимента существенно расширился, несмотря на то что количество принимаемой крысами пищи было одинаковым. Так, прибавка в весе за время эксперимента варьировала от 265 до 370 г для самцов и от 110 до 156 г для самок. Более того, неожиданно ока­залось, что крысы с самыми высокими значениями ис­ходной массы тела к концу эксперимента имели самый низкий вес. Наиболее вероятным объяснением этих странных результатов является недостаточный конт­роль и уход за животными. К сожалению, в таких усло­виях весьма затруднительно проводить корректное сравнение различных групп, так как невозможно точно установить причину различий в результатах. Так, на­пример, заявления о том, что именно этот трансгенный сорт кукурузы не имел значимого эффекта на рост крыс, не подкрепляются полученными данными.

Существуют и другие проблемы, связанные с рос­том крыс. Количество принимаемой крысами пищи было одинаковым на протяжении всего времени экспе­римента. Однако прирост массы не был ровным. К седь­мой неделе изменения массы тела стали довольно странными, а в последние четыре недели эксперимента крысы практически не росли. Это значит, что в послед­ние недели усваиваемость пищи катастрофически уме­ньшилась. Никакого объяснения этому явлению не да­ется. По моему мнению, наиболее подходящим объяс­нением этому, кроме недостаточного контроля и ухода за животными, служат возможные проблемы с пита­тельным составом диет, вероятно, по причине включе­ния в них кукурузы. Однако поскольку в отчете не пред­ставлено точной информации о том, какие именно бел­ки были включены в диеты, чтобы составить всю их белковую компоненту, не может быть сделано никаких дальнейших выводов по этому вопросу.

В разные недели эксперимента некоторые живот­ные имели негативные изменения массы тела, за кото­рыми последовали необычно большие позитивные из­менения. Например, самец № 386612 в течение 11-й не­дели похудел на 53 г, но затем прибавил в весе 102 г в течение 12-й недели. Опять же эти проблемы указыва­ют на недостаточный контроль и уход за животными, ставят под сомнение значение полученных в ходе всей работы результатов и затрудняют их оценку и интер­претацию.

Обследование животных

При определении массы ряда важных внутренних органов (но не их сухая масса), включая печень, почки и т.д., не производилось взвешивания ни одного отрезка желудочно-кишечного тракта и ни одной мышцы, с тем чтобы установить возможные эффекты диеты, в состав которой входила ГМ кукуруза, на эти органы, несмотря на то, что в литературе имеется множество источников, указывающих на подобные эффекты.

Клиническая патология

Большинство измерений механистичны, консерва­тивны и статичны. Хотя полученные результаты могут служить отправной точкой для дальнейших, более ди­намичных исследований, без их результатов наблюде­ние изменений у крыс, находящихся на ГМ диете, нель­зя считать завершенным. Таким образом, в данной си­туации нам оставлена лишь возможность обсуждать значимость либо незначительность обнаруженных из­менений. Например, увеличение количества лимфоци­тов крови может означать реакцию иммунной системы, вызванную присоединением какой-либо инфекции и т.д. Однако авторы не оценивали иммунную реактив­ность крыс и не определяли уровень специфических иммуноглобулинов слизистых оболочек либо уровень гуморальных антител к компонентам ГМ кукурузы и, в частности, к экспрессированному Вt-токсину, хотя ука­зания на возможность появления таких антител неодно­кратно публиковались в серьезных научных журналах. Также общеизвестным является то, что изменения кон­центрации базофилов могут сигнализировать об аллер-гизации и изменении уровня       IgЕ.

Несмотря на то что полученные результаты служат основанием для большей обеспокоенности в отноше­нии влияния ГМ диеты на организм, не было предпри­нято попыток продолжить эксперименты и прояснить эти влияния. И здесь — обширное поле для дальней­ших исследований!

Значимые гематологические эффекты. Общий ком­ментарий. Выявлены значимые различия между компо­нентами крови крыс, получавших диету с 33%-ным со­держанием ГМ кукурузы, и крыс из контрольных групп. Однако в данном случае авторы сознательно приуменьшают возможную значимость этих различий:

самцы — выявлены значимые различия в концент­рации лейкоцитов и, в частности, лимфоцитов и базо­филов, а также активированного частичного тромбино-вого времени (АЧТВ) у крыс на 33% ГМ диете по срав­нению с контролем. Также имелись значимые разли­чия в уровне эритроцитов, гемоглобина, гематокрита (не полностью), средней концентрации гемоглобина в эритроците (МСНС), ретикулоцитов, лимфоцитов, ба­зофилов между крысами на ГМ-диете и группой REF контроля (референтные группы);

самки — уровень эритроцитов, гемоглобина, рети­кулоцитов (как на 5-й, так и на 14-й неделе), базофилов у крыс на диете из ГМ кукурузы и крыс из контрольных групп существенно различался. Средняя концентрация гемоглобина в эритроците, содержание ретикулоцитов, базофилов, значения протромбинового времени и АЧТВ существенно различались у крыс на ГМ диете и группы КЕР контроля.

Биохимия крови:

самцы — концентрация общего белка, альбумина, глобулинов, аланинаминотрансферазы (АлАТ), каль­ция, хлоридов, глюкозы и креатинина в крови крыс из группы ГМ диеты отличалась от контроля. Уровень альбумина, щелочной фосфатазы, неорганических фос­фатов и мочевины был разным в крови крыс, питавших­ся ГМ кукурузой, и группы КЕР контроля;

самки — концентрация альбумина, глобулинов, хо­лестерина и триглицеридов в крови крыс из группы ГМ диеты отличалась от контроля. Уровень триглицеридов, АлАТ, кальция, неорганического фосфора и мочевины был разным в крови крыс, питавшихся ГМ кукурузой, и крыс из группы КЕР контроля.

Биохимические анализы мочи также выявили мно­жество существенных отличий между крысами, питав­шимися ГМ кукурузой, и контролем.

Патологическая анатомия — данные вскрытий

Описание того, что именно было сделано, чрезвы­чайно неадекватно. По всей видимости, технология ис­следований в области патологической анатомии была следующей: обученный персонал, используя протоко­лы исследования, утвержденные сертифицированными патологами, невооруженным глазом осматривали туш­ки забитых животных, анатомические отверстия тела, брюшную, грудную полости и полость черепа, а также органы и ткани. Результаты этих осмотров сведены в таблицы клинических и макроскопических наблюде­ний (табл. 1, 3-5), состоящие из множества страниц практически бесполезных данных. Единственная цель включения этих таблиц в отчет — измучить читателя бесконечными числами, не подкрепленными никакой информацией. Еще более примечательно то, что если читатель в конце концов доберется до табл. 6, он смо­жет получить некоторую качественную (но не количе­ственную) информацию, указывающую на то, что пе­чень, почки, желудок и прямая кишка у самцов (нечто подобное наблюдалось и у самок) оказались поражены значительнее у группы крыс, питавшихся диетой с 33% ГМ кукурузой, чем в соответствующих контрольных группах.

Консервация тканей — гистопатология. Вся инфор­мация, заключенная в отчете, состоит в следующем:

ткани, фиксированные формалином, были заключены в парафин, приготовлены срезы, которые затем окраше­ны гематоксилином и эозином и изучены микроскопи­чески. О методологии, использованной в ходе исследо­вания, практически ничего не известно.

Выводы

Хотя это несовершенное по дизайну и исполнению исследование выявило длинный список существенных различий между рядом важных биологических пара­метров у крыс, получавших ГМ кукурузу, по сравнению с соответствующими контрольными группами и даже с группой КЕР контроля, не представляется возможным утверждать, что все эти статистически значимые разли­чия являются также и биологически значимыми. Одна­ко нет оснований и для утверждения обратного. Такие основания могут появиться только по получении ре­зультатов соответствующих дальнейших исследова­ний. Некоторые примеры и предложения по таким ис­следованиям были даны выше в критической оценке.

Первое и главное, что хотелось бы отметить: более скромное и менее масштабное исследование, которое имело бы лучший дизайн, лучше контролировалось и выполнялось, позволило бы с большей уверенностью судить о значимости и обоснованности всех финаль­ных данных эксперимента и возможности сравнения различных экспериментальных групп между собой. Учитывая то, как в действительности было проведено это исследование, весь эксперимент по кормлению сле­довало бы повторить. Однако выявленный список зна­чимых различий означает, что уверенность авторов в том, что генетическая модификация кукурузы не вызы­вает никаких существенных изменений в пищевой цен­ности и биологических, иммунологических и других свойствах этой важной сельскохозяйственной культу­ры, практически не имеет под собой основания. Невоз­можно объяснить значительные повреждения таких важных органов, как печень и почки, или существен­ные изменения параметров крови (лимфоцитов, грану-л  оцитов, глюкозы и др.) простой случайностью и био­логической вариабельностью особей. Крайне необхо­димо уйти от простой механистичной аналитической работы, так как использование только этого метода не позволяет проследить и описать ту динамическую си­туацию, которая возникает при кормлении животных ГМ кукурузой.

Жаль, что такое большое количество проделанной работы принесло столь малые дивиденды. Более крити­ческое и внимательное отношение исследователей к ра­нее выполненным и опубликованным работам по дие­тологическим, токсикологическим, иммунологическим свойствам ГМ культур, позволило бы им сделать значи­тельный вклад в понимание тех эффектов, которые ГМ продукты могут иметь на организм человека и животных.

Список использованной литературы:

1.                  Материалы сайта Гринпис России – http://www.greenpeace.ru